Nanog基因启动子分离及功能分析

来源 :中国科学院上海生命科学研究院生物化学和细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gxfcs
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  本研究初步分析了Nanog基因启动子结构及功能。我们首先从小鼠胚胎噬菌体基因组文库中筛选出两个阳性克隆并将较长的Nanog基因片断约17Kb亚克隆到pBluescriptSKII(+)体中以便进一步分析。 本文用pGL3-Basic为表达载体构建了系列删除突变体,通过转染未分化F9细胞确定了3个转录活性区域,并且第一个启动子区域活性最高。通过转染分化F9细胞发现第一个启动子区域表达受分化作用抑制,而另两个则不受分化作用影响。第一个启动子区域序列分析发现一个可能的Oct-1结合位点,突变该位点后导致该区域活性消失。本文介绍了凝胶阻滞实验结果表明有三种蛋白可以结合到该位点,其中分子量最小的蛋白结合作用最强。 本文超迁移实验表明作用最强的蛋白是Oct-4。我们对启动子区上游序列分析结果表明在-1571/-270之间有负调控作用,而且在分化细胞中显示对第三个启动子区域起着抑制作用。而5端1.1kb发挥正调控作用,而且这种作用受分化作用调控。对其他可能的转录因了作用位点研究发现AP1位点突变后明显减弱了第一个启动子的活性。剖析了凝胶阻滞实验未发现有蛋白因子结合的特性。
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