论文部分内容阅读
研究目的子痫前期（Preeclampsia,PE）是影响最大的妊娠期心血管疾病风险的不良暴露,与后期发生的心血管疾病有共同病生理机制,包括内皮功能异常、氧化应激、炎症等方面。早期筛查和干预子痫前期,是心血管病早期预防的开始。故应该对其进行综合性预防和控制。miR-15b作为小片段调节性RNA,以一种干扰活动的媒介物形式大量地存于在细胞中,然后在转录后水平发挥相关的调节作用。最近,很多研究显示它对调控细胞增殖活动、细胞侵袭、成管能力、细胞凋亡过程等方面有着积极的作用。近年来有细胞实验显示miR-15b可以VEGFR-2mRNA为靶位抑制滋养细胞的侵袭和内皮细胞管的形成,进而影响螺旋动脉重塑。然而,miR-15b在PE等病理性妊娠发病中的作用研究较少。本研究通过分析人类胎盘组织中miR-15b、VEGFR-2的表达水平,以探索用于预防PE的因子可行性;讨论相关因子在胎盘滋养层细胞中作用,探讨该通路可能在防治PE方面的应用意义,为PE的发病机理和临床早期防治提供新的研究方向和科学依据。研究内容与方法在中国人民武装警察部队特色医学中心产科搜集2018年6月至2019年9月期间分娩的轻度子痫前期（Mild preeclampsia）孕妇15例和重度子痫前期（Severe preeclampsia）孕妇16例作为观察组,同时收集正常孕妇24例作为研究对照组;运用逆转录聚合酶链反应技术（RT-PCR）技术检测胎盘中miR-15b、VEGFR-2mRNA的相对表达水平;运用免疫组化法明确VEGFR-2的蛋白水平以及在人类胎盘组织中的特异性表达位点,并利用免疫印迹技术分析胎盘中VEGFR-2的蛋白表达水平。研究资料根据资料分布状态和应用条件,进行恰当描述。定量资料数据统计处理采用成组资料的参数或非参数检验方法。定性资料根据数据条件采用卡方或校正卡方或确切概率方法进行数据分析。研究结果研究对象临床基本资料结果显示,正常孕妇和轻度、重度子痫前期组孕妇在妊娠年龄、分娩孕龄、心率、血红蛋白、血小板等临床数据基本一致,未见统计学差异（P﹥0.05）;然而,收缩压、舒张压、BMI在不同研究组中不一致(F收缩压=22.74,F舒张压=19.26,FBMI=12.46,P﹤0.05);轻度和重度子痫前期孕妇的入院收缩压、舒张压、BMI均较正常对照组高(P收缩压﹤0.05;P舒张压﹤0.05;PBMI﹤0.05);孕期增加体重增加结果显示,重度子痫前期组的孕期增加体重较对照组增加明显（P﹤0.05）。miR-15b相对表达水平研究结果显示,轻度子痫前期（PE）组和重度子痫前期（SPE）组miR-15b相对表达水平分别为1.61±0.41和2.67±0.53,较对照组（1.00±0.12）升高(P轻度子痫前期VS对照组=0.000;P重度子痫前期VS对照组=0.000)。同时,随着PE程度的加深,miR-15b相对表达水平也增加(P重度子痫前期VS轻度子痫前期=0.000)。然而,VEGFR-2mRNA表现出与miR-15b相对表达水平相反的趋势。即,VEGFR-2mRNA在PE和SPE中表达是降低的（分别是0.30±0.07比1.00±0.14,P=0.000和0.29±0.11比1.00±0.14,P=0.000）。但未见不同PE程度存在差异（P重度子痫前期VS轻度子痫前期=0.727）。VEGFR-2蛋白在三组病例胎盘组织的表达位点基本相同,主要位于绒毛滋养层细胞和蜕膜细胞中的细胞核和细胞浆。与对照组相比,轻度、重度子痫前期两组的表达强度均降低（分别为11.15±1.68比18.61±2.32,P=0.009;10.83±3.07比18.61±2.32,P=0.008）,轻度和重度子痫前期相比无统计学差异（11.15±1.68比10.83±3.07,P=0.877）;Western blot结果显示,相比于对照组,轻度和重度子痫前期VEGFR-2表达水平均降低且有统计学意义（0.84±0.30比1.13±0.04,P=0.001;0.92±0.07比1.13±0.04,P=0.008）。轻度与重度子痫前期组在VEGFR-2表达差异上无统计学意义（0.84±0.30比0.92±0.07,P=0.134）。研究结论miR-15b、VEGFR-2mRNA相关途径有可能在子痫前期发病机制中起着重要的作用。miR-15b能够影响胎盘中滋养层细胞等的增殖、侵袭和后期的子宫螺旋动脉重塑过程,这表明它或许可以为子痫前期的早期防治以及心血管疾病的早期预防提供一个新的研究方向。