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猝死(SuddenUnexpectedNaturalDeath,SUND)是由于潜在的疾病或功能障碍(功能、代谢障碍)所引起的突然的意外的死亡,又称为急死。引起猝死的原因很多,几乎所有系统的疾病均有引起猝死的可能性,但其发生率有所不同,据国内外统计资料表明:在成人猝死中心血管系统疾病占首位,呼吸系统或神经系统疾病居次。急性心肌缺血所致猝死的鉴定一直是法医学重要而棘手的问题,历来为各国法医学者所关注。心肌细胞发生严重缺血时,一般在6-12小时后才出现心肌梗死等组织学变化,而对于急性心肌缺血6小时内猝死者,尸检结果常常发现冠状动脉有粥样硬化的病变,但却无典型的组织学变化,用常规HE染色很难做出心肌梗死的诊断。针对急性心肌缺血引起的猝死的法医学鉴定,国内外进行了大量的研究。迄今为止,仍未找到一个灵敏、特异的指标应用于法医临床检案,急性心肌缺血的死后诊断仍然没有较好的解决,需要寻找新的,具有实用价值的诊断指标。
目前已知在哺乳动物细胞中广泛存在一个O2敏感的基因表达调控系统,调节缺氧状况下涉及的一系列特定基因的表达缺氧诱导因子1(hypoxia-induciblefactor1,HIF1)作为缺氧应答的全局性调控因子能够广泛激活缺氧相关生理反应的众多基因如VEGF等,精确调节细胞代谢中的氧气浓度。心肌缺血必然会导致供氧降低,心肌缺血缺氧后会刺激侧枝循环形成以代偿组织的需要。缺血缺氧能引起HIF1和VEGF等基因表达上调。在体内外培养的心肌细胞和动物心肌梗死实验中,证实缺血与缺氧是刺激HIF1和VEGFmRNA和其蛋白表达增加的强烈诱导因素。但对其在急性心肌缺血中的表达变化规律研究较少,而将它应用于法医死因鉴定更鲜有报道。
为探讨HIF-1α和VEGF在心肌缺血中的表达规律,及其在急性心肌缺血和急性心肌缺血性猝死中的诊断价值,本研究在SD大鼠上建立急性心肌缺血的试验模型,采用RT-PCR方法观察HIF1α和VEGFRNA在缺血心肌24h内的表达规律,采用免疫组化、Westernblot方法观察HIF1α和VEGF蛋白在心肌缺血24h内的表达规律。根据其表达规律,在适当的时间点处死大鼠模型,然后采用RT-PCR和Westernblot观察HIF1α和VEGFRNA和蛋白质在死后的稳定性,为缺血性猝死的诊断提供实验室依据,并探讨HIF1α和VEGF用于缺血性猝死诊断的时间窗。实验同时还观察了HIF1α和VEGF在窒息死亡大鼠心肌中的表达,以了解两者是否能够将心肌缺血性猝死和其他急性死亡区别开来。