忧遁草叶提取物解酒、保肝及抗氧化功能的研究

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酒在全球的消耗量逐年递增,每年因饮酒而死亡的人数占死亡总数的5.9%,其中以急性酒精中毒和酒精性肝损伤的伤害最大。因此,对解酒保肝药物的研制迫在眉睫。从天然植物中寻求安全高效的功能性组分是解酒保肝药物研究的重要方向。忧遁草(Clinacanthus nutans)是东南亚国家普遍使用的药食两用植物,具有抗氧化、抑制氧化应激、抗炎等与解酒护肝原理相关的各种生理功能,含有黄酮、多酚和多糖等各类解酒保肝功能性成分。基于此,本文先对忧遁草叶的营养成分进行分析,再对忧遁草叶提取物解酒功能组分进行筛选,对筛选组分的抗氧化能力进行对比分析,然后用酒精和四氯化碳诱导急性肝损伤模型对解酒组分的保肝功能进行探究,最后用各类层析柱对解酒保肝组分进行分离得到单体。为忧遁草叶资源的合理开发提供了理论基础。本文对忧遁草叶主要的研究内容和结果如下:首先,对忧遁草干叶主要的营养成分测定分析。结果表明灰分、蛋白、脂肪和总膳食纤维的含量分别为13.5%、25.3%、2.3%和22.4%。总黄酮11.04 mg/g、多酚12.62 mg/g、多糖42.66 mg/g。含7种必需氨基酸,10种非必需氨基酸,EAA/NEAA和EAA/TAA值分别为0.62和0.38,与FAO/WHO推荐的理想值相当。同时含14种脂肪酸,亚麻酸占比达55%。此外还含钾(26898.1 mg/kg)、钙(21701.4 mg/kg)、铁(574.6 mg/kg)、锌(36.9 mg/kg)、硒(1.33mg/kg)等多种微量元素。其次,用75%乙醇回流提取忧遁草叶和水提取醇提滤渣,得忧遁草叶醇提物(P1)和水提物(P2)两个部分。建立小鼠醉酒模型来比较P1和P2的解酒作用,结果发现P1解酒作用强于P2。P1利用大孔树脂进行分离,得到A(水洗)、B(10~50%醇洗)、C(70~90%醇洗)三个部分。实验发现B能降低饮酒小鼠的死亡率和醉酒率,使醉酒潜伏期和醉酒睡眠时间显著延长和缩短(P<0.01 or P<0.05),B部分能显著提高小鼠酒后60 min时肝脏ADH(乙醇脱氢酶)和ALDH(乙醛脱氢酶)的活性及降低血醇的含量(P<0.01 or P<0.05)。利用ABTS、DPPH和FRAP法对P1、P2及A、B、C抗氧化能力进行测试,结果表明在实验浓度梯度下,P1强于P2,B、C强于A。忧遁草叶提取物的解酒功效与其抗氧化的能力存在一定的关联性。然后,利用酒精和四氯化碳诱导两种急性肝损伤模型来研究B的保肝功能。观察发现,经B预处理过的小鼠的毛色、大便、精神状态等比模型都明显好转,肝脏和脾脏的肿大被显著抑制(P<0.01 or P<0.05)。B还能显著降低血清中的AST(谷草转氨酶)和ALT(谷丙转氨酶)活力(P<0.05),维持肝细胞膜和线粒体的结构。B组肝脏SOD(超氧化物歧化酶)和GPX(谷胱甘肽过氧化物酶)活性较模型组显著提高(P<0.05),MDA(丙二醛)的量显著降低(P<0.05),肝脏抗氧化能力得到提升,脂质的过氧化作用得到有效抑制。表明B具有保肝的作用。最后对B组分用MCI柱分离,得到B1和B2两部分。将B1和B2反复上样至各类ODS柱进行分离纯化。从B1中得到三个单体化合物:Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ;从B2中得到两个单体化合物:Ⅳ、Ⅴ。利用核磁共振(NMR)解析得到的单体化合物结构:化合物Ⅰ和Ⅳ都为3′,4′,7-三羟基-5-羟甲基-6-C-β-D-葡糖糖二氢黄酮醇碳苷,化合物Ⅱ为吲唑,化合物Ⅲ为巴尔蒂苷,化合物Ⅴ为2,3-二氢山萘酚3-氧-β-D-半乳糖苷。化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅴ均首次从忧遁草中发现。总之,忧遁草叶营养丰富,是补充必需氨基酸和钙、铁、钾、锌、硒等矿物质元素的良好来源。忧遁草叶中的巴尔蒂苷(环烯醚萜化合物)和二氢黄酮醇类化合物可能是解酒保肝及抗氧化功能性成分,其作用效果和相关机制有待进一步的研究。
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