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猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是导致猪圆环病毒相关性疾病(Porcine circovirus associated disease,PCVAD)的重要病原体。肠道炎症是PCV2引起的一个重要的临床表现;肠道感染被认为是PCV2感染的重要途径;近年来研究发现非编码RNA(miRNA、lncRNA、circRNA)在凋亡及炎症病理反应中有重要的调控作用。基于此,本研究选材以猪小肠上皮细胞(porcine intestinal epithelial cells,IPEC-J2)为细胞模型,以高通量测序为基础,分析PCV2感染IPEC-J2细胞中非编码RNA差异表达,以凋亡及细胞因子分泌两方面为切入点,对非编码RNA在PCV2感染诱导炎症反应过程中的作用进行验证,以期揭示非编码RNA在PCV2感染诱导猪肠道炎症反应中所发挥的调控作用,主要研究结果如下:1.PCV2感染诱导了IPEC-J2细胞凋亡及细胞因子表达的改变。为探讨PCV2感染对IPEC-J2细胞凋亡及细胞因子表达的影响,在对IPEC-J2细胞用PCV2感染处理不同时间点后(0 h、12 h、24 h、36 h、48 h)进行了凋亡率和细胞因子分泌的检测,结果发现随着PCV2感染时间的延长,IPEC-J2细胞凋亡率呈逐渐上升趋势,各细胞因子(TNF-α、IL-8、IL-6、IL-7、INF-γ、IL-4、IL-10、TGF-β)的表达也受到显著影响,综合衡量凋亡及细胞因子的表达情况后,选取PCV2感染36 h后的IPEC-J2细胞进行全转录组测序。2.PCV2感染对IPEC-J2细胞miRNA、lncRNA、circRNA表达谱的影响。通过利用高通量测序技术和生物信息学方法对PCV2感染IPEC-J2细胞非编码RNA表达谱进行分析研究。差异分析显示:显著差异表达的miRNA有93个,circRNA有210个,lncRNA有197个;在差异表达的miRNA中有24个上调,69个下调,circRNA中102个上调,108个下调,lncRNA中129个上调,68个下调(fold change>1.5,p<0.01)。对测序结果进行Real-time PCR验证,结果显示与高通量测序检测结果一致。采用Target Scan和miRanda算法预测差异表达miRNA、lncRNA、circRNA的靶基因,并对预测的靶基因进行了GO功能注释和KEGG聚类分析。3.ssc-miR-429-3p对PCV2感染IPEC-J2细胞凋亡及细胞因子表达的调控。根据生物信息学分析结果,筛选差异表达显著且与凋亡及细胞因子分泌相关的miRNA ssc-miR-429-3p作为研究对象,在对ssc-miR-429-3p过表达后处理后检测IPEC-J2细胞凋亡及细胞因子分泌情况。结果发现过表达ssc-miR-429-3p导致IPEC-J2的细胞凋亡降低,细胞因子分泌发生变化,表明ssc-miR-429-3p在PCV2诱导IPEC-J2凋亡和细胞因子分泌过程中起到调节作用。对ssc-miR-429-3p靶基因进行预测并验证,结果发现过表达ssc-miR-429-3p后含有IL1A 3’UTR重组质粒的细胞双荧光素酶活性显著降低,表明IL1A是ssc-miR-429-3p的靶基因。4.circRNA4410,lncRNA MSTRG.19762.1对PCV2感染IPEC-J2细胞凋亡及细胞因子表达的调控。经软件预测发现circRNA4410,lncRNA MSTRG.19762.1序列中有ssc-miR-429-3p结合位点,通过RNA反义纯化技术(RNA Antisense Purification,RAP)验证表明circRNA4410,lncRNA MSTRG.19762.1与ssc-miR-429-3p靶向结合,且干扰circRNA4410,lncRNA MSTRG.19762.1表达后,发现IPEC-J2细胞凋亡及细胞因子分泌受到影响;同时circRNA4410,lncRNA MSTRG.19762.1能增强ssc-miR-429-3p靶基因IL1A表达水平,综合结果表明circRNA4410,lncRNA MSTRG.19762.1能够通过结合ssc-miR-429-3p解除ssc-miR-429-3p对靶基因IL1A基因表达的抑制作用,进而调控IPEC-J2细胞的凋亡、细胞因子分泌。本研究从不同视角认识PCV2与宿主的相互作用机制;为阐明PCV2感染和致病分子机制奠定基础;为PCV2的深入研究提供新的思路。