非编码RNA在PCV2感染诱导猪肠上皮细胞炎症反应中的作用研究

来源 :湖南农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shenth_1980
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2,PCV2)是导致猪圆环病毒相关性疾病(Porcine circovirus associated disease,PCVAD)的重要病原体。肠道炎症是PCV2引起的一个重要的临床表现;肠道感染被认为是PCV2感染的重要途径;近年来研究发现非编码RNA(miRNA、lncRNA、circRNA)在凋亡及炎症病理反应中有重要的调控作用。基于此,本研究选材以猪小肠上皮细胞(porcine intestinal epithelial cells,IPEC-J2)为细胞模型,以高通量测序为基础,分析PCV2感染IPEC-J2细胞中非编码RNA差异表达,以凋亡及细胞因子分泌两方面为切入点,对非编码RNA在PCV2感染诱导炎症反应过程中的作用进行验证,以期揭示非编码RNA在PCV2感染诱导猪肠道炎症反应中所发挥的调控作用,主要研究结果如下:1.PCV2感染诱导了IPEC-J2细胞凋亡及细胞因子表达的改变。为探讨PCV2感染对IPEC-J2细胞凋亡及细胞因子表达的影响,在对IPEC-J2细胞用PCV2感染处理不同时间点后(0 h、12 h、24 h、36 h、48 h)进行了凋亡率和细胞因子分泌的检测,结果发现随着PCV2感染时间的延长,IPEC-J2细胞凋亡率呈逐渐上升趋势,各细胞因子(TNF-α、IL-8、IL-6、IL-7、INF-γ、IL-4、IL-10、TGF-β)的表达也受到显著影响,综合衡量凋亡及细胞因子的表达情况后,选取PCV2感染36 h后的IPEC-J2细胞进行全转录组测序。2.PCV2感染对IPEC-J2细胞miRNA、lncRNA、circRNA表达谱的影响。通过利用高通量测序技术和生物信息学方法对PCV2感染IPEC-J2细胞非编码RNA表达谱进行分析研究。差异分析显示:显著差异表达的miRNA有93个,circRNA有210个,lncRNA有197个;在差异表达的miRNA中有24个上调,69个下调,circRNA中102个上调,108个下调,lncRNA中129个上调,68个下调(fold change>1.5,p<0.01)。对测序结果进行Real-time PCR验证,结果显示与高通量测序检测结果一致。采用Target Scan和miRanda算法预测差异表达miRNA、lncRNA、circRNA的靶基因,并对预测的靶基因进行了GO功能注释和KEGG聚类分析。3.ssc-miR-429-3p对PCV2感染IPEC-J2细胞凋亡及细胞因子表达的调控。根据生物信息学分析结果,筛选差异表达显著且与凋亡及细胞因子分泌相关的miRNA ssc-miR-429-3p作为研究对象,在对ssc-miR-429-3p过表达后处理后检测IPEC-J2细胞凋亡及细胞因子分泌情况。结果发现过表达ssc-miR-429-3p导致IPEC-J2的细胞凋亡降低,细胞因子分泌发生变化,表明ssc-miR-429-3p在PCV2诱导IPEC-J2凋亡和细胞因子分泌过程中起到调节作用。对ssc-miR-429-3p靶基因进行预测并验证,结果发现过表达ssc-miR-429-3p后含有IL1A 3’UTR重组质粒的细胞双荧光素酶活性显著降低,表明IL1A是ssc-miR-429-3p的靶基因。4.circRNA4410,lncRNA MSTRG.19762.1对PCV2感染IPEC-J2细胞凋亡及细胞因子表达的调控。经软件预测发现circRNA4410,lncRNA MSTRG.19762.1序列中有ssc-miR-429-3p结合位点,通过RNA反义纯化技术(RNA Antisense Purification,RAP)验证表明circRNA4410,lncRNA MSTRG.19762.1与ssc-miR-429-3p靶向结合,且干扰circRNA4410,lncRNA MSTRG.19762.1表达后,发现IPEC-J2细胞凋亡及细胞因子分泌受到影响;同时circRNA4410,lncRNA MSTRG.19762.1能增强ssc-miR-429-3p靶基因IL1A表达水平,综合结果表明circRNA4410,lncRNA MSTRG.19762.1能够通过结合ssc-miR-429-3p解除ssc-miR-429-3p对靶基因IL1A基因表达的抑制作用,进而调控IPEC-J2细胞的凋亡、细胞因子分泌。本研究从不同视角认识PCV2与宿主的相互作用机制;为阐明PCV2感染和致病分子机制奠定基础;为PCV2的深入研究提供新的思路。
其他文献
教育部2017年发出基于核心素养教学改革的先声,并于《普通高中语文课程标准(2017年版)》中明确了语文核心素养的四个维度:"语言建构与运用,思维发展与提升,审美鉴赏与创造,文化传承与理解。"虽然是高中"课标"明确提出,但语文核心素养不是在高中阶段突然形成的,而是在小学和初中阶段逐步培养、逐渐稳定的。一、用"学历案"助力任务群学习2017年以来,吉林省第二实验学校一直致力于研究让核心素养落地
期刊
指向核心素养的语文教学变革已然走向前端。如何让学生通过学习提升语文核心素养,逐步形成具有语文特质的关键能力、必备品格与价值观念?本文从专业学习方案设计的角度进行了一些从理念到行动的探索。
一、语文学历案对传统教案学习活动设计的改进语文学历案基于学生立场,呈现学习目标达成过程,不仅促进学生"学习",而且帮助学生"学会",促进深度学习。学历案设计的学习活动与传统的教案相比,有几个显著特征:1.全员参与。学历案的学习活动基于专题学
期刊
"十四五"开局之年,教育部相继出台文件,对抓好中小学生作业、睡眠、手机、读物、体质等"五项管理"作出部署。"五项管理"中,作业管理是落实"双减"的核心,也是能否做好其他四项管理的关键。为进一步规范学校作业管理,成都市温江区光华实验小学紧紧围绕"轻负高质"这个作业管理的核心,探索出"融—研—评—展"的作业策略,让作业成为学生独立学习的场域,促进学生全面发展。
期刊
教师教了,但学生不会,问题出在哪?核心素养时代,我们不仅关注教师教了什么,更关注学生何以学会。本书作为《教案的革命:基于课程标准的学历案》的升级版,不仅是从"课时"到"单元"的扩容,更是整合论教学的新探索。这种整合旨在为核心素养目标的实现提供可行路径,旨在为深度教学的实践提供逻辑支撑。
期刊
以江苏南京溧水区的一个小镇为调研点,借助访谈法对覆盖该镇区全域的一个国家级农业技术产业示范区进行案例研究,以三螺旋为理论指导并从中提炼出分析框架,通过分析发现:在平台建设初期政府一直处于主导地位;由于服务型政府理念的兴起和理性"经济人"假设推动政府功能发生延展,"公共服务者"和"公共投资商"角色形态开始显露。最后,政府与其他主体互构形成成熟的功能耦合网络,带领园区对整个社会实现递归效应。
柑橘果胶是从柑橘果皮中提取的一种果胶,相对分子质量较大,对人体没有非常有效的功用,低分子质量柑橘果胶是将天然柑橘果胶经过改性处理后的果胶,是一种新兴的生物活性多糖。为了提高柑橘果胶的利用价值,本文采用100℃-130℃的亚临界水来降解柑橘果胶使之转化为低分子质量果胶,研究改性前后果胶组分、结构的变化,并结合流变学、降解动力学的研究来分析其作用机制。在此基础上,从抗氧化活性、抗肿瘤活性、免疫调节活性
羧甲基赖氨酸(Nε-carboxymethyllysine,CML)是美拉德反应中晚期糖基化终末产物(Advanced Glycation End-products,AGEs)的重要成分。CML通过食品介质进入人体后,可积聚于多个不同的组织器官中,达到一定数量后,会直接影响组织器官的功能,导致机体病理的变化。本论文从建立CML的检测方法入手,研究了CML在食品中的形成规律和水果多酚对其抑制的作用机
黑茶既可通过后熟作用提升品质,也可能提升健康价值。良好的贮藏条件和一定贮藏年份的黑茶通常被认为具有更好的品饮属性与健康属性,因而市场上经常出现“以新充老”、“以次充好”的不良现象,扰乱市场秩序,并导致大量的黑茶长期处于贮藏期,并未进入消费市场,不利于维护茶叶产销平衡。因此,如何科学地辨别黑茶的仓储陈化年限,促进陈年黑茶的快速流通与消费,保障生产和消费者权益、规范市场监管,是保障黑茶产业健康发展急需