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背景:T细胞免疫球蛋白粘附分子-3(T cell Ig and mucin domain protein3,Tim-3)最初被发现于活化的Th1、Th17、Tc1效应细胞上,与其天然配体半乳糖结合蛋白-9(Galectin-9,Gal-9)结合后可诱导T效应细胞的凋亡,下调免疫反应,诱导免疫耐受。然而随着研究的深入,人们发现Tim-3也表达在DC、巨噬细胞等天然免疫细胞上,并参与天然免疫的调节。由于Tim-3在天然免疫和适应性免疫反应中均具有重要的作用,所以它的表达失调与很多临床疾病相关。Tim-3的低表达与T细胞功能增强的自身免疫性疾病有关,如多发性硬化和自身免疫性肝炎;Tim-3的过表达与T细胞功能丧失相关的疾病有关,如肿瘤或慢性细菌性感染。脓毒血症是由感染诱发的全身性过度炎症反应。据统计全球每年有1800万人发病,在非休克患者中,其死亡率为30％—40%,而在休克患者中其死亡率则高达70%—90%。即便在发达国家如美国,一年就有近25万脓毒血症死亡病例。脓毒血症发病率仍存在上升的趋势,但目前尚缺乏有效的诊治手段。另外有越来越多的数据显示,参与天然免疫反应的Tim-3具有免疫自稳调节的功能。Tim-3是否能够促进脓毒血症的免疫自稳,成为治疗脓毒血症的新措施,目前还不清楚。 目的:Tim-3在天然免疫和适应性免疫应答中起非常重要的免疫调节作用,探究该分子在脓毒血症中的可能免疫调节作用及其机制。 方法: 1、收集脓毒血症患者血标本,观察不同病情患者Tim-3表达情况;构建经典脓毒血症动物模型—盲肠结扎穿刺术,观察模型发病过程中Tim-3的动态变化;给予Tim-3单抗或者Tim-3融合蛋白,观察Tim-3通路阻断后,CLP生存率和脾脏细胞因子变化情况。 2、观察Tim-3单抗对CLP腹腔巨噬表达细胞细胞因子的影响;观察CLP不同严重程度时,腹腔巨噬细胞表达Tim-3情况;观察稳定低/高表达Tim-3 RAW264.7细胞系的吞噬能力及其对TLRs激动剂的反应性。 3、检测RAW264.7细胞系/小鼠腹腔巨噬细胞受到不同浓度LPS或不同时间点LPS刺激后,Tim-3表达情况;Tim-3单抗对LPS模型脾脏细胞因子的影响;Tim-3单抗对TLR4-KO-CLP的生存率和脾脏细胞因子影响。 结果: 1、与轻度脓毒血症患者相比,重症患者外周血中表达Tim-3下降;CLP模型随着时间的延长,Tim-3表达呈先升高后下降的趋势,并且与sham相比,CLP小鼠Tim-3表达下降;给予Tim-3单抗或者Tim-3融合蛋白,Tim-3通路阻断,CLP生存率下降,脾脏细胞因子(IL-1β、IL-6、TLR4等)均呈现上升趋势。 2、Tim-3单抗阻断CLP体内Tim-3通路后, CLP腹腔巨噬表达细胞细胞因子呈升高趋势;与sham相比, CLP小鼠腹腔巨噬细胞表达Tim-3下降;观察稳定低/高表达Tim-3 RAW264.7细胞系的吞噬能力及其对TLRs激动剂的反应性,发现Tim-3表达下降时细胞系的吞噬能力提高,对TLRs的反应性升高,Tim-3表达升高时变化相反。 3、检测RAW264.7细胞系受到不同浓度LPS或不同时间点LPS刺激后,Tim-3表达呈双向趋势,小鼠腹腔巨噬细胞受到不同LPS刺激后,随着LPS浓度升高Tim-3表达下降;LPS模型时, Tim-3单抗阻断Tim-3通路后,脾脏细胞因子呈升高趋势; Tim-3单抗对TLR4-KO-CLP的生存率和脾脏细胞因子没有明显影响。 结论:Tim-3低表达或者Tim-3通路的阻断后脓毒血症病情加重。因此Tim-3可能在维持脓毒血症的免疫自稳机制中发挥了一定的作用。另外,巨噬细胞的过度活化能够导致脓毒血症的系统性炎症反应。当阻断Tim-3通路或者低表达Tim-3时,巨噬细胞的活化程度却能够明显增强;当巨噬细胞高表达Tim-3时,该细胞上TLRs介导的促炎因子的合成明显受到抑制,这表明Tim-3是TLRs介导的免疫反应的负调控因子。TLR4与Tim-3通路具有相互抑制的作用,TLR4是Tim-3负调控反应中重要的调节因子。因此,Tim-3通过抑制TLR4反应维持脓毒血症的免疫自稳。