【摘 要】
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目的:反复多次用长波紫外线（UVA）照射成纤维细胞,建立光老化模型,探究长波紫外线（UVA）对人皮肤成纤维细胞（HSF）光老化作用的分子机制。方法:取20-40岁的健康男子包皮组织,胰酶消化法分离真皮成纤维细胞后取第3-8代成纤维细胞进行后续实验,采用0 J/cm2、5 J/cm2、7.5 J/cm2、10J/cm2剂量UVA分别照射HSF,于照射后48h观察成纤维细胞,通过CCK8技术测试细胞的
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目的:反复多次用长波紫外线（UVA）照射成纤维细胞,建立光老化模型,探究长波紫外线（UVA）对人皮肤成纤维细胞（HSF）光老化作用的分子机制。方法:取20-40岁的健康男子包皮组织,胰酶消化法分离真皮成纤维细胞后取第3-8代成纤维细胞进行后续实验,采用0 J/cm2、5 J/cm2、7.5 J/cm2、10J/cm2剂量UVA分别照射HSF,于照射后48h观察成纤维细胞,通过CCK8技术测试细胞的增殖活性,将皮肤成纤维细胞分成7个组,A:空白对照组;B:UVA照射对照组;C组:0.01umol/L染料木素组;D组0.1umol/L染料木素组;E:1umol/L染料木素组;F:10umol/L染料木素组;G:100 umol/L染料木素组,B、C、D、E、F、G组均照射UVA。CCK8技术测定染料木素对成纤维增殖能力的影响;蛋白印迹法（Western-blot）测定空白组、照射组、染料木素组中衰老相关蛋白p21的表达变化;small RNA测序技术检测光老化模型中差异表达的microRNA,用miranda、targetscan、starbase数据库预测部分差异表达microRNA靶基因,对预测得到的目标靶基因进行GO、KEGG富集分析,筛选出占据核心地位的microRNA及microRNA调控的目标靶基因,对结果进行分析。结果:0 J/cm2、5 J/cm2、7.5 J/cm2、10J/cm2UVA照射后,用CCK8试剂检测不同光照强度下HSF的增殖能力变化,UVA处理组HSF出现衰老表现,细胞增殖能力较前降低（P<0.05）,与B组比较,C-F组增殖活性较高,差异有统计学意义（P<0.05）。在5J/cm2UVA照射后,有70%以上的成纤维细胞保持活力,结合先前的文献报道,本研究选取5J/cm2UVA建立光老化模型,每天在固定时间照射1次,一共照射5天。照射后48h检测细胞衰老相关蛋白p21表达量较空白对照组增加。根据差异显著性筛选出7个microRNA:hsa-mi R-1290,hsa-mi R-1307-5p,hsa-hsa-mi R-663a,hsa-mi R-10396a-5p,hsa-mi R-3195,hsa-mi R-9901,hsa-mi R-10401-5p。采用生物信息学技术对筛选出的microRNA分析,miranda、targetscan、starbase数据库预测部分差异表达microRNA的靶基因,提示差异表达的microRNA可能和轴突发生、胚胎器官发育、钙调蛋白结合、金属离子跨膜转运蛋白活性有关。结论:UVA照射可以导致成纤维细胞光老化,一定浓度的染料木素（0.01umol/L-10umol/L）对成纤维细胞光老化具有保护作用,差异表达的microRNA可能通过作用于目标靶基因调控细胞的光老化过程。
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