【摘 要】
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目的:探究TAGLN在甲状腺乳头状癌中的作用及影响,发现与之相关的信号通路,寻找治疗甲状腺乳头状癌潜在的干预治疗靶点。方法:在青岛大学附属医院收集自2018年6月至2019年6月因患甲状腺乳头状癌（PTC）并行甲状腺切除术的100例患者的PTC组织及配对癌旁正常甲状腺组织,提取RNA及蛋白,分别采用实时定量PCR技术、Western blot方法分析PTC组织及其配对癌旁正常甲状腺组织中TAGLN
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目的:探究TAGLN在甲状腺乳头状癌中的作用及影响,发现与之相关的信号通路,寻找治疗甲状腺乳头状癌潜在的干预治疗靶点。方法:在青岛大学附属医院收集自2018年6月至2019年6月因患甲状腺乳头状癌（PTC）并行甲状腺切除术的100例患者的PTC组织及配对癌旁正常甲状腺组织,提取RNA及蛋白,分别采用实时定量PCR技术、Western blot方法分析PTC组织及其配对癌旁正常甲状腺组织中TAGLN在转录和蛋白水平的表达差异,同时使用免疫组织化学染色法对TAGLN做定位分析;分别使用TAGLN过表达质粒和TAGLN sh RNA慢病毒载体转染PTC细胞,并通过RT-qPCR和Western blot对其转染效率进行验证;通过CCK-8细胞增殖实验检测过表达和RNA干扰TAGLN对PTC细胞增殖能力的影响;采用Transwell细胞侵袭和迁移实验检测过表达和RNA干扰TAGLN对PTC细胞侵袭和迁移的影响;通过在裸鼠皮下注射稳定表达TAGLN sh RNA的BCPAP细胞,验证RNA干扰TAGLN对肿瘤增殖能力的影响;应用Western blot分别检测在PTC细胞中过表达和RNA干扰TAGLN对MAPK/ERK信号通路活性的影响。使用SPSS 24.0进行统计学分析,应用Graphpad Prism 8绘图。结果:通过RT-qPCR证实TAGLN mRNA相对表达量在PTC组织与配对癌旁正常甲状腺组织中无明显差异（P>0.05）;然而,Western blot结果证明TAGLN在PTC组织中的蛋白相对表达水平明显低于癌旁正常甲状腺组织（P<0.0001）;免疫组化结果表明,在PTC组织中TAGLN高表达的阳性细胞数明显少于癌旁正常甲状腺组织,其主要分布于甲状腺滤泡上皮细胞和部分组织间质中。CCK-8法检测过表达和敲减TAGLN对PTC细胞增殖能力的影响:在BCPAP和TPC-1细胞中的过表达TAGLN组比空载体对照组的细胞增殖能力明显降低,而RNA干扰TAGLN组的细胞增殖能力显著强于空载体对照组;Transwell细胞侵袭和迁移实验结果显示:过表达TAGLN的BCPAP和TPC-1细胞与对照组相比,细胞侵袭和迁移能力明显减弱,而RNA干扰TAGLN组比对照组的细胞侵袭和迁移能力显著增加。裸鼠移植瘤实验进一步验证TAGLN敲减后明显促进肿瘤的生长。Western blot蛋白水平检测相关信号通路的验证结果表明:过表达TAGLN可使PTC细胞中的细胞外调节蛋白激酶（ERK）磷酸化水平显著降低,而RNA干扰TAGLN可使p-ERK表达水平则显著升高。结论:1.TAGLN基因在PTC组织中的蛋白相对表达量明显低于配对癌旁正常甲状腺组织,其主要分布于甲状腺滤泡上皮细胞胞质。2.过表达TAGLN基因明显抑制PTC细胞的增殖、侵袭及迁移能力,而RNA干扰TAGLN基因则会使PTC细胞的增殖、侵袭及迁移能力显著增强。3.TAGLN基因可能通过抑制MAPK/ERK信号通路的激活,进而抑制PTC细胞的增殖、侵袭及迁移等恶性生物学行为。4.TAGLN作为一种抑癌基因在PTC的发生和发展中起重要作用。
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