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为研究不同水平的酵母硒(Selenium-enriched Yeast, SeY)和亚硒酸钠(Sodium Selenite, SS)对组织硒存留、组织抗氧化系统以及两种硒的代谢产物对人小细胞肺癌细胞株NCI-H446增殖的影响而进行了以下四个试验：试验一：不同日粮水平的SeY和SS对生长猪组织抗氧化系统和硒存留的影响为研究日粮SeY和SS水平对猪肝脏和肌肉中组织硒存留和抗氧化系统的影响,60头28日龄断奶仔猪随机分配到两期试验中即一期试验和二期试验中。两期试验分别设3个处理,每个处理10个重复。所有仔猪在饲喂用缺硒地区所产玉米-大豆配制的低硒日粮(0.03 mg kg-1 Se) 4周后分成6组,分别饲喂8周的基础日粮(0.04 mg kg-1 Se)添加0,0.3和3.0 mg kg -1的SeY(一期试验)和0,0.3和3.0 mg kg -1的SS(二期试验)。结果表明：与0.3 mg kg-1 SeY和SS相比,日粮0或3.0 mg kg-1 SS和SeY对猪的采食量、日增重和饲料转化率均无显著影响。当SS和SeY的水平从0增加到0.3 mg kg-1,猪肝脏、肌肉和血浆中GPX活性均极显著(P<0.01)提高；但3.0 mg kg-1 SeY和SS均未能(P>0.05)在其相应的0.3 mg kg-1水平上继续提高肝脏、肌肉和血浆中GPX活性。在0-3.0 mg kg-1范围内日粮SeY和SS的水平对猪血浆、肝脏和肌肉中SOD和GST活性无显著影响。随着日粮SeY水平在0-3.0 mg kg-1范围内的升高,猪肝脏、肌肉和血浆中的硒含量均极显著(P<0.01)提高。在0-3.0 mg kg-1范围内日粮SS极显著(P<0.01)提高了猪肝脏硒含量,显著(P<0.05)提高肌肉硒含量,而血浆中硒含量在0.3 mg kg-1 SS水平即达到平台。这表明8周内日粮SeY和SS的缺乏或过量对猪生产性能和组织抗氧化系统无显著影响,但能提高肝脏和肌肉的硒存留。试验二：不同日粮水平的SeY和SS对猪肝脏和肌肉中的硒化物NBS/PBS分布的影响试验一的结果表明随着日粮SeY和SS的水平增加,肝脏和肌肉中硒存留量显著提高,但两种组织中硒是以蛋白结合硒(Protein-bound Selenium, PBS)或是非蛋白结合硒(Nonprotein-bound Selenium, NBS)的形式存在不清楚。本实验研究日粮SeY和SS水平对猪肝脏和肌肉中PBS& NBS的分布如影响。为此首先建立一套改良的分离猪组织中NBS和PBS的方法,用此方法分离测定了试验一中饲喂0-3.0 mg kg-1 SeY和SS两种硒的猪肝脏和肌肉中NBS和PBS的含量。结果表明：随着日粮SeY的升高,肝脏和肌肉中NBS和PBS的绝对含量均极显著(P<0.01)升高。肝脏中PBS占其总硒的相对含量随日粮SeY的增加而降低(P<0.01),相应地肝脏中NBS占其总硒的相对含量随日粮SeY水平的升高而增加(P<0.05)；与肝脏形成对比的是肌肉中NBS和PBS占其总硒的相对含量随日粮SeY的增加分别保持稳定在6%和94%。与饲喂SeY的猪肝脏NBS和PBS变化规律类似,饲喂SS的猪肝脏中NBS和PBS占其总硒的相对含量随SS的升高分别表现为显著升高(P<0.05)和显著降低(P<0.05),饲喂SS的猪肌肉中NBS和PBS的变化规律与肝脏类似,分别表现为随日粮SS的增加而显著升高(P<0.05)和降低(P<0.05)。这些表明日粮SeY和SS对肝脏中NBS和PBS的分布模式的影响类似,而对肌肉中NBS和PBS的分布模式影响不同。试验三：饲喂过量SeY和SS的猪肝脏中NBS对人肺癌细胞增殖的影响上述实验结果表明日粮SeY和SS均能极显著提高肝脏中NBS的绝对含量和相对含量,且对饲喂SeY和SS的猪肝脏中NBS和PBS的分布模式的影响一致。本实验旨在研究饲喂高水平酵母硒和亚硒酸钠16周的猪肝脏中是否含有抑制人肺癌细胞增殖功能的NBS。取饲喂16周基础日粮(0.05mg Se kg-1)及添加3.0mg kg-1 SeY和3.0 mg kg-1 SS的三种猪肝在超纯水中匀浆,匀浆液分别用氯仿和乙醇沉淀去除蛋白后所得清液经冷冻干燥浓缩、超滤和过滤除菌后得到含有NBS的硒含量分别为0.98μM,2.62μM和7.84 pM的肝脏提取物(Liver Extract,LE),分别简写为LEB, LEY和LES。将三种LE分别加入到癌细胞培养体系中,结果表明当添加水平在14%时LEY和LES能显著抑制人肺癌细胞的增殖,且诱导癌细胞的凋亡。亚硒酸钠是硒抗癌研究中的标准物质,而当在LEB中添加亚硒酸钠达到与LEY和LES中同等Se水平再添加到细胞培养体系后发现LEY和LES仍能显著抑制癌细胞的增殖,这说明LEY和LES中的NBS抑制癌细胞的能力高于亚硒酸钠,即饲喂3.0 mg/kg SeY或SS的猪肝脏中含有比亚硒酸钠抗癌活性更强的硒化物。试验四：饲喂3.0 mg/kg SeY和SS的猪血清对人肺癌细胞增殖的影响试验三表明饲喂3.0 mg kg-1 SS和3.0 mg kg-1 SeY的猪肝脏中有抑制人肺癌细胞增殖的硒化物。根据硒的代谢规律和抗癌功能,推测饲喂3.0 mg/kg SeY或SS的猪血清中也可能含有抗癌的硒化物。本实验旨在研究饲喂高水平日粮SeY和SS的猪血液中是否含有抑制人肺癌细胞增殖的物质。前腔静脉采集饲喂基础日粮(0.03 mg kg-1 Se)以及基础日粮添加3.0mg kg-1 SeY和3.0mg kg-1 SS 16周的猪清,经0.22μm滤膜过滤除菌后得到总硒含量分别为165 ng ml-1,1316 ng ml-1和834 ng ml-1的三种猪血清,分别简写为Se(0), SeY(3)和SS(3)。为探索猪血清代替FBS培养细胞的最佳添加水平,在培养液中添加7个梯度(8%-20%)的猪血清,根据细胞的MTT OD值随血清添加水平的变化Se(0)、SeY(3)和SS(3)三种猪血清的最适添加比例分别为17.79%,15.39%和14.31%,取三者的均值15.83%作为猪血清的最适添加水平。根据细胞在48h,96h和144h三个时间点的形态变化取144 h作为细胞最适培养时间。试验结果表明Se(0)猪血清培养癌细胞的MTTOD值显著(P<0.05)高于SS(3)猪血清,而SeY(3)与Se(0)和SS(3)猪血清处理细胞的MTT OD值均无显著差异。与SeY(3)和SS(3)相比,Se(缺)比培养细胞的上清液中LDH活性均显著(P<0.05)降低,而SeY(3)和SS(3)两者培养细胞上清中LDH活性无显著差异。细胞经Annexin V和PI双染后经流式细胞仪分析表明,Se(0)比SS(3)培养细胞的凋亡率显著降低(P<0.05)；而SeY(3)培养细胞的凋亡率介于Se(0)和SS(3)之间,与两者差异均不显著。上述表明饲喂3.0 mg kg-1 SS的猪血清中含有抑制人肺癌细胞增殖的硒化物。本研究通过对日粮SeY和SS在猪肝脏和肌肉中代谢存留的研究机理我们推测饲喂3.0 mg/kg SeY或SS的猪肝脏中可能具有抑制人癌细胞增殖的硒化物。通过将从饲喂过量SeY和SS猪的肝脏中提取的含有NBS猪肝提取物添加到人肺癌细胞培养液中证明了这个推测。最后根据硒的代谢证明饲喂高3.0 mg/kg SS的日粮猪血清中含有抑制人肺癌细胞增殖的硒化物。