维生素C(Vitamin C,VC)又称L-抗坏血酸,作为一种维持体内生命活动的重要物质,在体内许多细胞过程中起到重要的作用。研究表明,维生素C能有效清除细胞内的活性氧自由基(Reactive Oxygen Species,ROS),以及影响卵丘细胞生理状态,但具体途径和机制尚不明确。在哺乳动物的卵巢中,细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)对于卵泡发育和卵巢功能具有很重要的影响。其中I型胶原蛋白的结构最为典型,I型胶原蛋白α1链(COL1A1),作为细胞外基质的主要成分,在调控一些癌细胞生理状态中具有重要作用。但是,它在牛卵丘细胞中的作用仍不清楚。为了探究维生素C及细胞外基质的结构蛋白对卵丘细胞的影响,我们通过使用维生素C处理牛卵丘细胞并探讨其通过COL1A1对卵丘细胞生理状态与功能的影响。因此,本研究首先进行卵丘细胞体外培养,采用流式细胞术探讨了维生素C对细胞凋亡的影响,并通过CCK-8探究了其对细胞增殖的影响。此外,通过荧光定量PCR对细胞外基质结构相关基因表达的影响。结果表明,100μM的维生素C可有效抑制牛卵丘细胞凋亡,而该浓度的维生素C可以显著促进细胞复制水平。而qRT-PCR结果表明,添加维生素C可提高COL1A1基因的表达水平,并且具有极显著的影响。随后,为明确COL1A1的具体作用,本研究通过siRNA抑制卵丘细胞中COL1A1的表达,分别通过流式细胞术和CCK-8实验测定卵丘细胞周期和增殖水平;通过JC-1测定线粒体膜电位变化;通过免疫荧光检测细胞自噬水平;通过细胞划痕测定法和qRT-PCR检测细胞迁移和扩散能力;通过酶标仪检测乳酸和胆固醇的浓度进而评价卵丘细胞中葡萄糖的利用和胆固醇的合成活性;通过qRT-PCR和western-blot分析用于测量关键基因表达的变化。结果表明,经siRNA敲减COL1A1表达后,牛卵丘细胞具有异常的细胞周期,S期细胞数量明显减少,胆固醇合成减少,细胞增殖能力降低,凋亡率增加。这些发现可能是由于抑制COL1A1导致细胞中的ROS含量高,线粒体膜电位降低,细胞内自噬增加,凋亡途径激活以及乳酸转化能力降低。表明COL1A1在调节牛卵丘细胞的生理和生物学功能中起重要作用。综上所述,我们发现维生素C除了可以影响细胞凋亡及增殖外,还可以影响细胞外基质的结构蛋白COL1A1的表达,进而对牛卵丘细胞的各种重要生理功能发挥潜在作用。本研究为进一步了解维生素C的生物学功能、有效利用维生素C提供了新思路,并对细胞外基质对牛卵丘细胞凋亡及增殖影响的机制提供了理论依据