鸡传染性法氏囊病病毒VP3基因的克隆与原核表达

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鸡传染性法氏囊病(IBD)是由鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的鸡的一种高度接触性传染病,由于其在亚临床感染中的免疫抑制作用和在急性感染中的高死亡率,传染性法氏囊病是养禽业的一个重要疾病。VP3是IBDV的主要结构蛋白,具有群特异性的抗原决定簇,也是IBDV主要的免疫原性蛋白。 本研究利用RT-PCR技术,对从河北某鸡场分离的IBDV分离株的VP3基因进行了扩增,并将PCR产物连接到克隆载体pMD18-TSimplevector,然后转化大肠杆菌。酶切和PCR鉴定的结果表明所克隆的片断大小为850bp左右。 将VP3基因克隆至原核表达载体pGEX-6P-1,经酶切和PCR鉴定,证明成功构建了重组表达载体pGEX-VP3。测序结果表明所克隆的片断大小为843bp。将VP3基因序列通过比对分析,与IBDV国际标准株Cu-1菌株核酸序列的同源性为96%。 在IPTG的诱导下,将构建好的融合表达载体在大肠杆菌中表达。融合蛋白GST-VP3的分子量约为58kD。经Western-Blot分析,融合蛋白与anti-GST抗体发生特异性反应,证明了该重组蛋白的表达。
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