PRRS是在20世纪80年代发现的一种动物传染病,此病每年给世界养猪业造成的损失达几十亿美元,间接损失难以计算。由于不同PRRSV分离株核苷酸序列存在广泛而明显的变异,给PRRS的准确检测和有效控制带来困难。本研究目的为通过分离和鉴定一株高变异PRRSV野毒株,构建和表达变异株和美洲标准株NSP2蛋白,建立ELISA方法用于区分灭活苗免疫猪与自然感染猪,为有效防控PRRSV,合理制定免疫程序提供依据。根据GenBank发表的PRRSVVR-2332毒株的基因序列,本研究针对NSP2基因设计了二对引物,利用RT- PCR方法,成功扩增出本实验室分离的PRRSV TA-12毒株的NSP2全基因。利用DNAStar软件分析NSP2蛋白的抗原表位,将NSP2基因共划分四个片段,按N端保守区划分两个片段,中间高变区为一个片段,C端保守区为一个片段,设计了四对带有酶切位点的引物,分别构建了重组质粒,将重组质粒转化到表达菌株BL21plys中,对重组菌进行诱导后,经过Western blot鉴定,结果显示外源蛋白在宿主菌中有表达。同时使用扩增TA-12NSP2高变区的引物RT-PCR扩增得到美洲标准株VR-2332 NSP2的对应基因片段,成功在宿主菌中表达。本实验进一步选择TA-12N端保守区,高变区纯化的重组蛋白为抗原,建立ELISA方法检测本实验收集的400份猪血清。ELISA结果显示PRRSV NSP2基因的中间区域突变株TA-12和美洲标准株的抗原表位具有不同的免疫原性,推测可以利用NSP2蛋白区分PRRSV突变株与标准株,为PRRSV的免疫监测提供依据。