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目的:通过观察真武汤对扩张型心肌病小鼠心室重构及心功能相关指标的影响,来探讨真武汤治疗扩张型心肌病的作用机制。为临床应用真武汤治疗扩张型心肌病提供科学的实验数据和理论基础。材料与方法:本研究以SPF级雄性cTnTR141W转基因扩张型心肌病小鼠60只,SPF级雄性C57BL/6J小鼠15只,为研究对象。均为4个月龄,体质量为20±3g。干预药物真武汤:按照《伤寒论》原方药物剂量及配伍比例拟方:炮附子15g,白术30g,茯苓45g,芍药45g,生姜45g。浓缩药液由辽宁中医药大学附属医院制剂室制备。对照药物为目前公认治疗扩张型心肌病的有效药物卡托普利片。将SPF级雄性cTnTR141W转基因扩张型心肌病小鼠60只,随机分为真武汤高剂量组,真武汤中剂量组,阳性药物对照组(卡托普利组),模型对照组,每组各15只。SPF级雄性C57BL/6J小鼠15只,为空白对照组。真武汤药物治疗组,给予真武汤灌胃。中剂量相当于生药量18.2g/(kg·d),高剂量相当于生药量36.4g/(kg·d),均制成0.6ml溶液,每日2次灌胃,每次0.3ml,持续用药1个月。阳性药物对照组,给予卡托普利灌胃,剂量为10mg/(kg·d),制成0.6ml溶液,每次0.3ml,每日2次灌胃,持续用药1个月。模型对照组和空白对照组均给予生理盐水灌胃,每次0.3ml,每日2次,持续1个月。实验结束后行小鼠心脏彩超检测;摘眼球取血,制备血清标本,冻存备用;断头处死小鼠后取心肌组织标本,冻存备用。实验一:采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定小鼠血清可溶性生长刺激表达基因2蛋白(ST2)、血清内皮素(ET)、血清基质金属蛋白酶1(MMP-1)的值。应用小动物彩色多普勒超声检测小鼠左心室收缩末内径(LVESD)、左心室舒张末内径(LVEDD)、左心室射血分数(EF)、左心室短轴缩短速率(FS)值。实验二:采用实时荧光定量PCR法,检测心肌组织Bax和Bcl-2 mRNA的表达;采用Western-blot法检测小鼠心肌组织Bax和Bcl-2蛋白的表达。统计分析:应用SPSS19.0统计软件进行统计分析,数据用均数加减标准差(?x±s)表示。组间比较采用单因素方差分析。数据经过正态性检验及方差齐性检验,符合正态分布,方差齐。P<0.05为结果有显著差异,有统计学意义。结果:1.各组小鼠彩超测量值比较与空白组比较,各组小鼠左心室射血分数均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,各药物治疗组小鼠左心室射血分数均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白组比较,各组小鼠左心室舒张末内径均显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,各药物治疗组小鼠左心室舒张末内径均显著减小,差异有统计学意义(P<0.05)。与空白组比较,各组小鼠左心室收缩末内径均显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,各药物治疗组小鼠左心室收缩末内径均显著减小,差异有统计学意义(P<0.05)。上述三项指标各药物治疗组比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白组比较,各组小鼠左心室短轴缩短速率均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,各药物治疗组小鼠左心室短轴缩短速率均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与中药中剂量组比较,中药高剂量组小鼠左心室短轴缩短速率显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。中药中、高剂量组与西药组相比差异无统计学意义(P>0.05)。2.各组小鼠血清ET水平比较与空白组比较,其余各组血清ET水平均显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较中药高剂量组ET水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);西药组、中药中剂量组ET水平有降低趋势,差异无统计学意义(P>0.05)。各药物治疗组ET水平变化,差异无统计学意义(P>0.05)。中药高剂量组与中药低剂量组比较,ET水平有降低趋势。3.各组小鼠血清ST-2水平比较与空白组比较,模型组可溶性ST2水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,西药组、中药高剂量组可溶性ST2水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与西药组相比,中药中剂量组可溶性ST2水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);中药高剂量组可溶性ST2水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与中药中剂量组相比,中药高剂量组可溶性ST2水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。4.各组小鼠血清MMP-1水平比较与空白组比较,模型组MMP-1水平显著升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,中药高剂量组、西药组MMP-1水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);中药中剂量组MMP-1水平显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。各药物治疗组MMP-1水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。中药高剂量组与中药低剂量组比较,MMP-1水平有降低趋势。5.各组心肌组织Bcl-2 mRNA表达水平比较与空白组比较,模型组(P<0.01)、西药组(P<0.05)、中药高剂量组(P<0.01)、中药中剂量组(P<0.01),Bcl-2 mRNA表达均显著下降,差异有统计学意义。与模型组比较,西药组Bcl-2 mRNA表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),中药高剂量组Bcl-2 mRNA表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。中药中剂量组Bcl-2mRNA表达有升高趋势,差异无统计学意义(P>0.05)。中药高剂量组与西药组、中药中剂量组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。中药中剂量组与西药组相比,Bcl-2 mRNA表达下降,差异有统计学意义(P<0.05)。6各组心肌组织Bax mRNA表达水平比较与空白组比较,模型组Bax mRNA表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);各药物治疗组与空白组比较Bax mRNA表达有增高趋势,差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较中药高剂量组Bax mRNA表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);西药组、中药中剂量组与模型组比较Bax mRNA表达有降低趋势,差异无统计学意义(P>0.05)。中药高剂量组与西药组、中药中剂量组相比Bax mRNA表达有降低趋势,差异无统计学意义(P>0.05)。中药中剂量组与西药组相比Bax mRNA表达有降低趋势,差异无统计学意义(P>0.05)。7各组心肌组织Bcl-2蛋白表达水平比较与空白组比较,各组Bcl-2蛋白表达均显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,西药组、中药高剂量组Bcl-2蛋白表达均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);中药中剂量组Bcl-2蛋白表达有升高趋势,差异无统计学意义(P>0.05)。与西药组相比,中药高剂量组Bcl-2蛋白表达有升高趋势,差异无统计学意义(P>0.05);中药中剂量组Bcl-2蛋白表达有降低趋势,差异无统计学意义(P>0.05)。与中药中剂量组比较,中药高剂量组Bcl-2蛋白表达有升高趋势,差异无统计学意义(P>0.05)。8各组心肌组织Bax蛋白表达水平比较与空白组比较,模型组Bax蛋白表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);西药组、中药中剂量组Bax蛋白表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.01);中药高剂量组Bax蛋白表达有升高趋势,差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,各药物治疗组Bax蛋白表达均显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与西药组相比,中药高剂量组Bax蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.01);中药中剂量组Bax蛋白表达有降低趋势,差异无统计学意义(P>0.05)。与中药中剂量组比较,中药高剂量组Bax蛋白表达有降低趋势,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.真武汤能够明显提高扩张型心肌病小鼠EF和FS值,降低LVEDD和LVESD值,改善扩张型心肌病小鼠心室重构,改善心功能。2.真武汤能够通过降低扩张型心肌病小鼠血清ET水平、可溶性ST2水平、MMP-1水平,来抑制心肌细胞重构,减少RAAS系统激活,抑制心肌纤维化,抑制心肌细胞外基质(ECM)重构,从而改善心室重构,进而改善心功能。3.真武汤能够通过上调扩张型心肌病小鼠Bcl-2基因及蛋白表达,下调Bax基因及蛋白表达,来干预凋亡调控因子,抑制心肌细胞凋亡,从而改善心室重构,进而改善心功能。