前言　　对于头颈部肿瘤而言，放射治疗占有非常重要的地位。但是面颈联合放疗野中常包含双侧唾液腺，会不可避免的造成唾液腺的损伤。随着近年来放射技术的飞速发展，包括适形调强放射治疗等，或多或少保护了唾液腺的功能，但是放射性唾液腺损伤仍然不可避免。经过常规照射治疗后的头颈部肿瘤的长期生存者中，大多数患者有中、重度的持续性口腔干燥[1]，直接或间接引起很多口腔问题:破坏口腔黏膜的完整性，增加患龋齿的危险，导致疼痛、味觉丧失、吞咽咀嚼困难、睡眠障碍以及口腔感染，最终会导致营养不良以及体重下降，严重影响病人的生活质量[2]。因此，如何防护唾液腺的损伤成为头颈部肿瘤放疗的另一个关注焦点。　　水通道蛋白5(AQP5)是涎腺细胞膜上重要的水通道蛋白，介导涎液中水的主动运输，在唾液的分泌中起到重要的作用。有研究表明，放射线照射后，在大鼠模型中，颌下腺AQP5的蛋白质表达显著降低.也有研究在辐射后急性和慢性阶段的唾液腺组织中观察到细胞凋亡增加，证明了水通道蛋白5表达降低及细胞凋亡增加可能与放疗引起的涎腺损伤有关。阿米福汀，又称氨磷汀，是美国食品药品管理局批准上市的第1个泛细胞保护剂，可作为自由基清除剂，清除放疗时体内过多产生的自由基，从而提高DNA修复速率，逆转细胞损害。在临床方面，很多研究证实了阿米福汀可以降低急慢性口干的发生，本实验就阿米福汀对放射后AQP5表达及细胞凋亡的影响来进一步探究阿米福汀对于放射性颌下腺损伤的保护机制。　　材料与方法　　一、材料　　1、实验对象　　SPF级Wistar大鼠30只，雌雄各半，月龄3个月，体重180-220g，购置于中国医科大学实验动物中心。　　2、主要的实验试剂　　AQP5第一抗体及TUNEL试剂盒购置于博士得公司，其余试剂及耗材购至于北京中衫金桥生物有限公司及北京尚柏生物有限公司。　　二、方法　　1、建立动物模型　　将30只大鼠应用随机数字表法随机分为4组。照射阿米福汀组（9只）:15Gy照射+amifostine200mg/kg，照射前15min腹腔内注射。照射盐水组（9只）:15Gy照射+生理盐水照射前15min腹腔内注射。对照阿米福汀组（6只）:单纯予amifostine200mg/kg腹腔内注射。对照盐水组（6只）:单纯予生理盐水腹腔内注射;照射后1个月取颌下腺，用剪刀将其横断，一半迅速放于4％中性甲醛固定液中固定，48小时后转入70％乙醇中保存;另一半放入-80℃深冻冰箱中保存。　　2、颌下腺组织HE染色　　将固定好的颌下腺组织修材、脱水、透明、包埋制成蜡块。切片做常规HE染色，显微镜下观察颌下腺组织的改变情况。　　3、免疫组化染色　　将蜡块切片做AQP5的免疫组化染色，显微镜下观察大致的表达情况及通过计算机测定其平均光密度值。　　4、Westernblot　　分析利用储存-80℃冰箱中的组织做Westernblot，测定AQP5蛋白的表达情况。　　5、TUNEL法测细胞凋亡　　蜡块切片用TUNEL法检测细胞凋亡，显微镜下观察大致细胞凋亡情况、计数细胞凋亡，计算凋亡指数。　　结果　　一、动物模型建立情况　　完成全部实验存活的大鼠共26只:照射阿米福汀组8只，照射盐水组6只，对照阿米福汀组6只，对照盐水组6只。　　二、HE染色　　镜下观察可见对照盐水组，对照阿米福汀组的大鼠颌下腺细胞形态正常，照射盐水组大鼠腺泡空泡样变性明显，大量的导管细胞退行性变及导管上皮细胞脱落，细胞间质水肿及少量纤维化，然而照射阿米福汀组的腺泡及导管空泡样变及退行性程度明显比照射盐水剂组轻。　　三、AQP5蛋白表达结果　　免疫组化结果观察了AQP5在正常颌下腺的定位表达及表达的变化，通过计算机测定其灰度值并进行统计学分析，结果表明AQP5主要位于腺泡细胞的细胞膜及腺泡细胞间的分泌小管，照射后30天照射盐水组阳性标记灰度明显减弱，蛋白表达与其他三组比较明显降低(p＜0.05)，照射阿米福汀组蛋白表达虽低于对照阿米福汀组及对照盐水组(p＜0.05)，但仍高于照射盐水组(p＜0.05)，两对照组的AQP5表达部位与染色强度没有明显差异(p＞0.05)。Westernblot分析通过测定蛋白灰度值与用作内参的GAPDH灰度值的比值并进行统计学分析后结果与免疫组化结果一致。　　四、TUNEL检测结果　　TUNEL结果分析通过每张切片随机选5个不重叠的高倍镜视野(×400)，计数阳性细胞，计算凋亡细胞指数（凋亡细胞数/视野中细胞总数），并进行统计学分析:照射盐水组颌下腺颌下腺凋亡明显，细胞凋亡指数明显高于其他三组(p＜0.05)，而其他三组未见明显细胞凋亡，组间未见差异(p＞0.05)。　　结论　　阿米福汀可以减轻放射性颌下腺损伤，其机制可能是通过减轻放射后颌下腺AQP5的损伤及抑制细胞的凋亡。