【摘 要】
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西马特罗（Cimaterol）属于β-肾上腺素受体激动剂中一种,在畜牧养殖过程中,在饲料里添加少量的西马特罗,可以提高动物肌蛋白的合成,促进动物肌肉快速增长,并且能够明显提升猪的瘦肉比例。但长期使用以后,西马特罗会残留在动物的内脏中,进而摄入进人体内,引起“瘦肉精”中毒,许多中毒者就会出现心跳加快和血压升高等症状,严重的危害了消费者的身心健康。仪器分析方法是西马特罗分析中常用的分析方法,但成本较高
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西马特罗（Cimaterol）属于β-肾上腺素受体激动剂中一种,在畜牧养殖过程中,在饲料里添加少量的西马特罗,可以提高动物肌蛋白的合成,促进动物肌肉快速增长,并且能够明显提升猪的瘦肉比例。但长期使用以后,西马特罗会残留在动物的内脏中,进而摄入进人体内,引起“瘦肉精”中毒,许多中毒者就会出现心跳加快和血压升高等症状,严重的危害了消费者的身心健康。仪器分析方法是西马特罗分析中常用的分析方法,但成本较高、前处理极为复杂,并且需要专业的操作人员,不适合现场快速检测。目前,免疫分析方法具有灵敏度高、快速、成本低、高通量等优点,在检测领域被广泛使用。本文通过建立快速检测猪尿中西马特罗的酶联免疫吸附法（ELISA）,并对方法条件进行优化,实现对目标物的定量检测,主要工作如下:（1）建立快速检测猪尿中西马特罗残留量ELISA方法。通过对抗体稀释倍数、抗原稀释倍数、标准稀释液选择、抗体稀释液等条件进行优化,得到西马特罗ELISA方法的最佳反应条件为:抗体稀释倍数为1:150000,抗原稀释倍数为1:100000,标准品稀释液为0.05 mol/L硼酸缓冲液,抗体稀释液为0.20 mol/L 2-（N-吗啉）乙磺酸（MES）缓冲液,标品稀释液p H为7.5,竞争反应时间为20min。在最佳反应条件下,绘制标准曲线,标准曲线拟合度好,相关系数R~2为0.9946,线性检测范围(IC20～IC80)为0.16μg/L～6.95μg/L,检出限为0.09μg/L,50%抑制药物浓度(IC50)为1.32μg/L。（2）从西马特罗ELISA方法特异性、准确度、精密度、稳定性等几个方面对建立试剂盒性能进行评价,结果显示:（1）所有的西马特罗抗体特异性好,除盐酸克伦特罗、苯乙醇胺A以外,与其他结构类似或功能类似的化合物交叉反应率小于1%,受其他化合物影响较小。（2）参照农业部1025号公告-11-2008建立超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）检测西马特罗方法,并绘制标准曲线,标准曲线线性回归方程Y=2587.3X-47.985（R~2=0.9997）,线性范围为0.5-100.0μg/L。并采用ELISA法与UPLC-MS/MS法测定同一加标水平样品,两种方法的相关性R~2达到0.9970,所建立的ELISA法可以用来检测猪尿中西马特罗含量。（3）当质量浓度在1.0μg/L～3.0μg/L范围内,批次内变异系数均小于9.00%,表明该方法重复性好。在相同实验条件下,在不同时间内测定样品,当质量浓度在0.5μg/L～3.0μg/L范围内,结果显示批间变异系数均小于20.00%,表明在不同时间段进行检测,试剂盒性能比较稳定,重现性较好。（4）在4℃～37℃储存条件下,西马特罗有较好的稳定性,同时在4℃条件下,酶联免疫方法更加稳定,说明试剂盒可在4℃保存半年以上。（3）组建西马特罗ELISA试剂盒,使用三个批次试剂盒对尿样进行西马特罗残留检测（ELISA）的试验,结果显示使用的试剂盒半抑制浓度为0.644μg/L～1.088μg/L,标准曲线的相关系数为0.9840～0.9970,而试验共测定样品90份,平均浓度值为0.114μg/L,其中有2份阳性样品（2.22%）,方法适用于实际样品检测。
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