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低温是影响玉米生产的重要的非生物胁迫之一,研究低温胁迫下玉米蛋白质表达差异,从蛋白质水平对玉米的自交系及杂交种进行分析,进而深入到基因水平的相关研究,对理解玉米的耐低温机理,进一步指导玉米耐低温育种具有重要意义。本实验以河南省农业科学院选育的杂交种郑单958及其亲本自交系郑58及昌7-2为材料,用4℃低温对玉米的幼芽进行24h的低温处理,并以25℃室温培养的幼芽作为对照,提取玉米芽的总蛋白,进行双向电泳。用ImageMaster2D Platinum软件对双向电泳图谱进行分析,寻找在低温胁迫下表达或抑制的差异蛋白。将表达差异明显的诱导蛋白回收送公司进行质谱鉴定,后对质谱鉴定反馈结果进行分析总结。结果如下:
(1)建立了稳定技术体系。该技术体系中Trizol法提取的蛋白质样品滤去了更多影响双向电泳的因素,获得了较高浓度的蛋白质样品,采用pH3-10线性IPG干胶条进行分离,经改良的考马斯亮蓝染色后,获得了重复性好、分辨率高的蛋白质双向电泳图谱,可从玉米芽中分离出800左右清晰的蛋白点。
(2)将杂交种郑单958及其亲本自交系郑58,昌7-24℃处理前后双向电泳图谱用ImageMaster2D Platinum软件分析,结果为,杂交种郑单958及其亲本自交系郑58和昌7-2在4℃处理前后蛋白质都出现明显的差异,其中昌7-2对4℃处理的应激反应最大。从蛋白质水平信息表达量可见郑单958所具有的杂种优势,且其亲本郑58和昌7-2的亲缘关系较远。
(3)依据质谱鉴定的结果,在NCBI数据库中查找得到,其中2个是玉米本身蛋白组中所有的,一个是果糖二磷酸醛缩酶,另一个是半胱氨酸过氧化物还原酶。而另外三个可能的来源是水稻和拟南芥,分别为脱落酸-8’-羟化酶类、乙烯应答转录因子、具有PPR结构域(pentatric opeptide repeat-containing protein)的Atl g63330蛋白同源,推测玉米的耐低温机制可能与这些蛋白具有相关性。