【摘 要】
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目的:构建汉滩病毒重组腺病毒疫苗并分析其诱导的免疫效果,探索发展新型的汉滩病毒疫苗。方法:1. 分别扩增和克隆汉滩病毒的M基因、G1和G2基因并进行序列分析。用杆状病毒载体表
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目的:构建汉滩病毒重组腺病毒疫苗并分析其诱导的免疫效果,探索发展新型的汉滩病毒疫苗。方法:1. 分别扩增和克隆汉滩病毒的M基因、G1和G2基因并进行序列分析。用杆状病毒载体表达上述基因编码的重组蛋白。2. 用腺病毒载体构建重组腺病毒vAd-G1、 vAd-G2及vAd-M,用Westernblotting等方法鉴定目的基因的表达。3. 采用重组腺病毒单独免疫、重组腺病毒与DNA疫苗联合免疫的方法接种小鼠,用ELISA、ELISPOT、流式细胞分析等技术观察诱导的体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫反应。用表达汉滩病毒M片段的重组痘病毒攻击免疫的地鼠,分析重组腺病毒疫苗诱导的保护效果。结果:1. 用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中成功表达了汉滩病毒G1和G2蛋白。表达的重组蛋白与病人血清和用灭活病毒免疫的兔血清均发生特异性反应。结果表明,表达的蛋白具有良好的抗原性。2. 汉滩病毒重组腺病毒疫苗免疫动物能诱导特异的免疫应答。重组腺病毒vAd-M诱导出较高水平的中和抗体和细胞免疫应答。重组腺病毒单独或与重组DNA疫苗联合免疫小鼠,均能诱导出特异的体液免疫、细胞免疫和黏膜免疫应答,并能抑制含M片段的重组痘病毒在地鼠体内的复制。结论:汉滩病毒重组腺病毒疫苗可诱导特异的保护性免疫应答。汉滩病毒重组腺病毒疫苗有望发展为一种新型的基因工程疫苗。
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