黄原胶是一种胞外水溶性多糖,具有假塑流变性、水溶性、增稠性、乳化性、稳定性等一系列优良的性质,使得其在食品、石油、化妆品行业、制药工业、日用化工等领域中有着广泛的应用。尽管黄原胶具备其他多糖所不可比拟的优越性,但它稳定的理化性质及粘性同时也会在石油开采后期增加处理的成本。此外,虽然黄原胶能引起植物的黑腐病,但它的降解产物却是黑腐病的抑制因子。最后,通过不同黄原胶修饰酶的作用可获得具有新理化特性的改性黄原胶产品,使其应用领域得到扩展。因此,黄原胶修饰的相关研究日益受到人们的关注。本论文分别以能降解食品级、石油级黄原胶的降解菌Microbacterium sp.XT11、Enterobacter sp.LB37 出发,采用简并 PCR(PCR:聚合酶链式反应,Polymerase Chain Reaction)、热不对称交错 PCR(Thermal Asymmetric Interlaced PCR,简称 TAIL-PCR),重叠延伸PCR(SOE-PCR或overlap PCR)等技术克隆得到XT11及LB37的黄原胶裂解酶全长基因。XT11的黄原胶裂解酶编码基因全长3.4 kb,其中前105 bp为分泌信号肽,后1154 bp为CBM;LB37的序列长约4.5 kb。随后将XT11及LB37黄原胶裂解酶编码基因进行异源表达,利用pGEX-2T及pET-28 a(+)载体,构建pGEX-XT-sxly、pET-28-XT-sxly、pGEX-LB-sxly重组质粒。将大肠杆菌Rosetta(DE3)作为表达宿主菌进行诱导表达,并纯化得到大小为78 kDa、104 kDa的重组裂解酶。后将重组的裂解酶进行酶学性质表征,得知其最适温度为40℃。