论文部分内容阅读
研究背景:抗中性粒细胞胞浆抗体(Anti-neutrophil cytoplasmic antibody,ANCA)相关血管炎(ANCA-associated vasculitis,AAV)是一种病理表现为全身中小血管炎症性坏死为特点的自身免疫性疾病。临床以肺、肾两个器官最常受累,且病情严重,起病急剧,进展凶险,死亡率高,预后差。及时评估病情、尽早采取有效干预措施,是AAV成功救治的关键。目前涌现出大量关于评价AAV患者病情严重程度及预测预后的生物学标志物,其中,伯明翰血管炎活动度评分(Birmingham vasculitis active scoring system,BVAS)是临床评估AAV患者全身受累情况及活动性最常用的关键性评分系统,但其存在主观性、复杂性等缺陷,临床实际应用容易产生偏倚。肾活检也是评估AAV患者肾脏受累的金标准,但是存在有创、结果反映不及时等缺陷。此外白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、C反应蛋白(C-reaction protein,CRP)、红细胞沉降率(Erythrocyte sedimentation rate,ESR)、中性粒细胞与淋巴细胞比率(Neutrophil to lymphocyte ratio,NLR)、血小板与淋巴细胞比率(Platelet to lymphocyte ratio,PLR)等炎症指标也逐渐被发现可以一定程度上反映疾病活动性,但目前临床应用敏感性差、特异性低、混杂因素多。因此寻找一种无创、特异性高且临床实际应用能广泛推行的潜在生物学指标,对于及时判断AAV病情严重程度,并给与有效指导治疗,改善患者生存预后,同时降低过度治疗带来的相关不良事件,将具有重要临床意义。CD19-CD27+CD38hi细胞,既往研究报道证实是一类具备抗体分泌功能的浆母细胞(Potent plasmablasts),或称前浆细胞(Pre-plasma cells)。数年来关于B细胞亚群在多发性硬化(Multiple sclerosis,MS)、系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)、类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)等多种自身免疫性疾病中被广泛研究,大多与疾病发病机制、病情活动度、疾病复发有关,但关于CD19-CD27+CD38hi细胞在AAV中的临床研究尚无报道。此研究旨在了解AAV患者循环B细胞亚群异常分布,并分析其在AAV中的作用及意义。研究方法:纳入2019年至2021年期间在我院肾内科新诊断的活动性AAV患者37例、治疗后症状改善的AAV患者8例、健康对照者25例。收集患者的新鲜外周血清冻存于-80℃。收集经肝素化抗凝处理的新鲜外周血,淋巴细胞分离液分离并获得外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)层。多色流式细胞分析术检测B细胞亚群频率。酶联免疫吸附实验(ELISA)检测血清抗髓过氧化物酶免疫球蛋白G(Anti-Myeloperoxidase Immunoglobulin G,Anti-MPO Ig G)浓度。经我院电子病历系统收集所有患者临床参数及病理资料。比较受试者外周循环各类B细胞亚群的频率差异。Spearman相关性分析比较CD19+浆母细胞、CD19-CD27+CD38hi细胞与各类指标的相关性。卡方或Fisher确切概率法比较两组间率的相对风险(Relative risk,RR)。Kaplan-Meier生存分析结合Log-rank检验比较CD19-CD27+CD38hi细胞高低水平两组患者累积生存率的差异。ROC曲线分析CD19-CD27+CD38hi细胞评估疾病活动性的诊断效能及预测肾脏预后。各B细胞亚群的表型根据人类免疫学免疫表型标准定义为:CD19+B细胞(CD3-CD14-CD16-CD56-CD19+)、过渡B细胞(CD3-CD14-CD16-CD56-CD19+CD27-Ig D+CD38hi)、初始B细胞(CD3-CD14-CD16-CD56-CD19+CD27-Ig D+CD38low)、CD27+记忆B细胞(CD3-CD14-CD16-CD56-CD19+CD27+)、未转换记忆B细胞(CD3-CD14-CD16-CD56-CD19+CD27+Ig D+)、类别转换记忆B细胞(CD3-CD14-CD16-CD56-CD19+CD27+Ig D-)、双阴性B细胞(CD3-CD14-CD16-CD56-CD19+CD27-Ig D-)、CD19+浆母细胞(CD3-CD14-CD16-CD56-CD19+CD27+Ig D-CD38hi)、Potent plasmablasts/Pre-plasma cells(CD3-CD14-CD16-CD56-CD19-CD27+CD38hi)。分组依据:采用三分位法计算初诊活动性AAV患者CD19-CD27+CD38hi细胞频率66.6%处截点值(cut-off)定义为最佳界值,并根据cut-off值将受试者分为CD19-CD27+CD38hi细胞高频率组与CD19-CD27+CD38hi细胞低频率组。同样,根据三分位法计算患者BVAS评分66.6%处截点值(cut-off)定义为最佳界值,并根据cut-off值将受试者分为非重症活动组与重症活动组。研究结果:1.AAV患者循环过渡B细胞频率较健康人降低(P(27)0.0001);而CD19+浆母细胞、CD19-CD27+CD38hi细胞频率较健康人增加(P=0.0005;P=0.0081)。2.循环过渡B细胞频率在活动性AAV患者降低,治疗后重塑(P=0.0012;P(27)0.0001)。3.循环CD19+浆母细胞、CD19-CD27+CD38hi细胞频率在活动性AAV患者增加(P(27)0.0001,P=0.0005),治疗后重塑(P=0.0020,P(27)0.0001)。4.循环CD19-CD27+CD38hi细胞频率与BVAS评分、血清D-二聚体、血清MPO-ANCA、?-球蛋白显著正相关(r=0.695,P=0.000;r=0.544,P=0.024;r=0.574,P=0.000;r=0.577,P=0.000);而与血清白蛋白显著负相关(r=0.356,P=0.033)。5.根据三分位法,计算初诊活动性AAV患者CD19-CD27+CD38hi细胞的cut-off值为0.101%,而BVAS的cut-off值为14;即低水平组为CD19-CD27+CD38hi细胞频率<0.101%,高水平组为CD19-CD27+CD38hi细胞频率≥0.101%。而非重症活动组为BVAS评分<14分,重症活动组为BVAS评分≥14分。6.高水平CD19-CD27+CD38hi细胞组出现重症AAV的频率高于低水平组(87.5%vs.23.5%P=0.0002);相较于低水平CD19-CD27+CD38hi细胞组,高水平组出现重症活动性AAV风险更高(RR=3.792,95%CI:1.693-10.790)。7.循环CD19+浆母细胞与BVAS评分、血清D-二聚体、血清MPO-ANCA水平显著正相关(r=0.506,P=0.001;r=0.539,P=0.026;r=0.364,P=0.029)。8.循环CD19-CD27+CD38hi细胞(AUC=0.919,P=0.001,95%CI:0.818-1)评估AAV活动性效能优于循环CD19+浆母细胞(AUC=0.766,P=0.039,95%CI:0.512-1),仅次于BVAS评分(AUC=1,P=0.000,95%CI:1-1);循环CD19-CD27+CD38hi细胞联合CD19+浆母细胞评估AAV疾病活动性诊断效能优于单一指标评估效能(AUC=0.932,P=0.001,95%CI:0.850-1)。9.循环外周辅助性T(Peripheral helper T,Tph)细胞与循环初始B(na?ve B)细胞频率、血清MPO-ANCA水平显著正相关(r=0.400,P=0.023;r=0.711,P(27)0.001),而与CD19-CD27+CD38hi细胞频率存在正相关趋势(r=0.273,P=0.137)。10.低水平CD19-CD27+CD38hi细胞组患者肾脏累积生存率高于高水平组(Log-Rank=6.838,P=0.009)。11.循环CD19-CD27+CD38hi细胞频率能够预测AAV肾脏不良结局(AUC=0.994,P<0.001)。结论:1.AAV患者循环CD19-CD27+CD38hi细胞频率增加,可反映疾病活动性,可能参与AAV发病机制,且能一定程度上预测AAV不良结局。2.AAV循环Tph与初始B细胞正相关,并与CD19-CD27+CD38hi细胞频率存在正相关趋势,可能通过辅助B细胞发育分化为抗体分泌细胞从而参与AAV发病机制。