论文部分内容阅读
本文研究了培育中间球海胆耐高温品系的选择育种方法和杂交育种方法及二者的可行性,并探讨了利用中间球海胆幼体高温下HSP70的表达进行耐高温品系早期选育的可行性。主要结果如下:本实验模拟了东海北部海域和黄海海域2个不同海域全年的水温环境,分别代表:高温水温环境(HE)和作为对照的适温水温环境(CE)。以实验室建立的F3代选育家系为实验材料,从8月龄的海胆中,挑选20个家系,再从中随机挑选11个家系,每个家系40枚海胆,剩余9个家系各20枚海胆,并随机将每个家系的20枚海胆分别放置到2个水温环境中(剩余9个家系置于HE中)。依据水温的变化和海胆的状态,2个水温环境均可以被分成5个时期:低温期,适温期,高温期,死亡期和恢复期。每个月测量一次实验海胆的壳径(TD)和体重(BW),并计算2种水温环境中各家系的存活率,以及2种模拟水温环境中海胆家系平均体重的特殊增长率(SGR)。结果表明,在适温环境的适温期,高温期,死亡期和恢复期,家系效应对壳径(TD)和体重(BW)具有显著影响(P<0.05)。在高温环境的高温期,死亡期和恢复期,家系效应对体重(BW)具有显著影响,而家系效应对壳径(TD)的显著影响仅体现在高温环境的死亡期和恢复期(P<0.05)。温度不仅能显著影响死亡期和恢复期的壳径(TD)和体重(BW),还能显著的影响各家系的存活率(P<0.05)。家系和温度的交互效应(G×E)对壳径(TD)和体重(BW)均没有显著的影响(P>0.05)。而存活率的家系排位变化表明交互效应的存在。家系和温度的交互效应(G×E)表明,在进行中间球海胆耐高温品种选育时,以生长性状为选育目标的时候,温度不会对选育的结果产生影响。然而以存活率为选育目标的时候,则需要考虑家系和温度的交互效应(G×E)的影响。根据家系和温度的交互效应及家系选择的结果,制定了相应的育种方案,为中间球海胆耐高温品系的培育提供了材料。本文对中间球海胆和光棘球海胆进行完全双列杂交。通过对自繁后代(Si♂×Si♀、Sn♂×Sn♀)和杂交子代(Sn♂×Si♀、Si♂×Sn♀)的幼体在18℃,22℃,26℃,30℃四个温度下的受精率、孵化率、各幼体时期的畸形率和生长进行了测量和分析。结果显示,杂交海胆的受精率均显著低于自繁海胆(P<0.05),Sn♂×Si♀杂交海胆在18℃下的孵化率与自繁海胆无差异。温度对光棘球海胆自繁和杂交海胆子代的受精率、孵化率均有显著影响(P<0.05),中间球海胆在22℃下的受精率和孵化率最高,而光棘球海胆的最适受精和孵化温度为18℃,Sn♂×Si♀杂交海胆最适受精温度为22℃,而最适孵化温度为18℃。温度对海胆幼体发育的畸形率和生长均有显著影响(P<0.05),三种海胆幼体的最适生长水温均为18℃。Sn♂×Si♀杂交海胆在四腕幼体时期的畸形率最低,体长最小,除八腕幼体时畸形率最高外,六腕幼体和八腕幼体时期的畸形率和生长性状均是介于自繁幼体之间。本研究结果表明,杂交海胆Sn♂×Si♀在胚胎发育早期具有母本的热耐受性和生长劣势,但是随着幼体的生长发育,母性效应逐渐减弱,其在生长方面逐渐体现出父本的生长优势。通过种间杂交的方法可以改善中间球海胆在胚胎发育早期的耐热性能和幼体发育后期的生长,而对于中间球海胆成体耐热性和生长的影响,则需要进一步的研究。研究了高温对中间球海胆原肠期、棱柱幼体期以及四腕幼体时期幼体发育的影响,及热激后各幼体时期HSP70的表达规律。结果表明,相对原肠期和棱柱幼体,四腕幼体对温度的耐受性较高,而棱柱幼体对温度的耐受性较低。海胆幼体经过热刺激以后不同时间点HSP70的表达量均具有显著差异。孵化之前的各时期,海胆幼体经过热激以后HSP70的表达量均是随着热激时间的增加而升高,并在4h达到峰值。而孵化后各时期的海胆幼体经过热激以后HSP70的表达量都是随着热激时间的增加而呈现先升高后降低的趋势,表达量的峰值出现在2h。在孵化前的各时期中,棱柱幼体的HSP70表达量最高;而六腕幼体的HSP70表达量远远高于其他所有时期的HSP70表达量。另外,高温刺激以后的棱柱幼体发育的畸形率为三种幼体中最高,同时热激后HSP70的表达量的峰值也为三种幼体中最高,说明热刺激后HSP70的表达和幼体发育的畸形率具有一定的相关性。而利用这种相关性,可以在中间球海胆的幼体发育阶段通过检测高温下HSP70的表达来进行早期选育,从而节省选育时间,提高选育效率。