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目的探讨低氧预处理的人脂肪来源干细胞（adipose-derived stem cells,ADSCs）和常氧处理的人脂肪来源干细胞在体外环境中对人皮肤真皮成纤维细胞（Human Dermal Fibroblasts,HDFs）衰老作用的影响。方法取正常成年人皮下脂肪组织和皮肤真皮组织,脂肪组织应用酶消化、真皮组织应用组织块法在体外进行分离、培养人脂肪来源干细胞（ADSCs）和人真皮成纤维细胞（HDFs）,并进行细胞鉴定;根据实验需要培养细胞、冻存。将生长状态良好的人脂肪来源干细胞进行传代培养,分别放入低氧培养工作站（1%O2、5%CO2、94%N2,37℃）和普通培养箱即常氧培养箱(21%O2、5%CO2、其余氮气平衡,37℃)培养,分别处理48小时后入组进行实验研究。实验设计为3组:空白对照组、实验组I、和实验组II。空白对照组为单纯培养真皮成纤维细胞;实验组I为常氧组、实验组II为低氧组,两组均采用悬挂式细胞培养皿（Transwell小室）构建ADSCs与HDFs之间非接触的间接共培养模型,下室均置入成纤维细胞,实验组I上室中置入普通培养箱培养的脂肪干细胞,实验组II上室中置入低氧培养工作站培养的脂肪干细胞。3组细胞均在普通培养箱内培养3天后进行真皮成纤维细胞衰老指标的相关检测。进行衰老指标的检测如下:A.细胞衰老相关的β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色,检测成纤维细胞的衰老情况;B.WST-1法分析测定各组成纤维细胞内的超氧化物歧化酶（SOD）活力;C.TBA法分析测定各组成纤维细胞内微量丙二醛（MDA）含量;D.ELISA法测定各组成纤维细胞内血管内皮生长因子（VEGF）浓度;E.Real-time PCR检测各组成纤维细胞衰老相关蛋白p16、p21、p53的mRNA表达水平。结果1、⑴从正常人体脂肪组织中提取的脂肪干细胞呈长梭形生长,流式细胞仪鉴定脂肪干细胞表面抗原CD73、CD90表达阳性,CD34、CD45表达阴性。诱导培养的脂肪干细胞可成功向成脂和成骨方向分化。⑵从人体皮肤真皮组织中提取的真皮成纤维细胞呈梭形、长条形、多角形或不规则形生长,免疫荧光鉴定特异性蛋白（fsp-1）、波形蛋白（vimentin）表达阳性,角蛋白（keratin）表达阴性。⑶实验组I、实验组II将ADSCs与HDFs共培养后,可见二者肉眼观均呈成纤维细胞样形态,未见明显形态学差异。2、根据SA-β-Gal染色阳性细胞率、SOD活力测定、MDA含量测定、VEGF浓度和RT-PCR检测衰老相关蛋白的mRNA表达水平显示:空白对照组衰老指标高于实验I组,实验I组衰老指标高于实验II组,空白对照组衰老指标明显高于实验II组,其差异具有统计学意义。结论本实验采用体外培养细胞法,通过低氧预处理人脂肪来源干细胞与人体皮肤真皮成纤维细胞间接共培养,检测真皮成纤维细胞的衰老程度。通过分子细胞生物学的检测验证:1、低氧预处理的人脂肪来源干细胞较常氧培养的人脂肪来源干细胞具有更高的生物活性;2、ADSCs对HDFs有一定的抗衰老作用,低氧环境下ADSCs的抗衰老作用更加显著。因此说明低氧预处理ADSCs具有降低细胞老化相关生物指标的作用。