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近年来,生物护肤开创了护肤产品的新纪元。生物护肤主要是在化妆品中添加生物活性因子,从而在分子水平上改善皮肤生长内环境、维持皮肤水分含量,使皮肤呈现水润紧致的健康状态。因而具备绿色、安全和无副作用的天然植物活性成分成为化妆品研究的热点。龙眼核常作为食品加工下脚料被废弃,但因其含有多糖、黄酮、甾醇和鞘磷脂等活性成分而具备一定的应用价值。本文采用超声辅助法提取龙眼核活性脂质,并对其进行有机溶剂萃取、硅胶柱层析分离、ODS柱层析分离,对总甾醇和神经酰胺含量较高的组分进行体外细胞抗干燥损伤试验及保湿机理的研究。主要内容如下:(1)采用超声辅助乙醇提取法从龙眼核中提取活性脂质,以总甾醇含量为主要的评价指标,活性脂质的得率为辅助评价指标,采用单因素和正交试验优化提取工艺。在料液比为1:15(g/mL),时间为40 min,温度为60℃的条件下,得率为10.86%,总甾醇含量为5.28 mg/g,主要含三萜类、皂苷、生物碱、酚类、鞣质、黄酮和有机酸类物质。(2)通过分级萃取法得到氯仿相(CEP),得率为34.62%,总甾醇含量为191.95 mg/g。利用Isolera硅胶柱层析对CEP进行分离得到CEP-2,得率和总甾醇含量分别为69.15%和518.26 mg/g。CEP-2中主要含有三萜类、鞣质、酚类和神经酰胺类物质。利用Isolera ODS柱层析对CEP-2进一步分离纯化得到20个组分CEP-2-1～20,经过TLC和HPLC-ELSD分析,其中CEP-2-13中神经酰胺的含量为855.0 mg/g,CEP-2-17中总甾醇含量为946.32 mg/g。通过红外光谱、TLC和UPLC-MS/MS对CEP-2-13进行定性测定,推测CEP-2-13中主要含有5种神经酰胺,分别是N-棕榈酸-D-鞘氨醇、N-十八碳烯酸-D-植物鞘氨醇、N-花生酰-D-鞘氨醇、N-二十四碳烯酸-D-植物鞘氨醇、N-十八碳烯酸-D-赤藓鞘氨醇。通过TLC和HPLC-ELSD对CEP-2-17的定性测定,推测CEP-2-17中主要含有豆甾醇和β-谷甾醇。(3)采用称重法测定活性脂质的保湿活性,以甘油和CER-3为对照,实验结果表明,在相对湿度为81%时,CEP-2-13的保湿活性强于CEP-2-17但略低于甘油;但在相对湿度为43%时,保湿活性依次为CEP-2-13>甘油>CER-3>CEP-2-17,即说明神经酰胺在低湿度的情况下保湿效果更好。在体保湿活性的研究表明,CEP-2-13能长时间维持皮肤中水分含量,且比CER-3和CEP-2-17的保湿效果好。CEP-2-13作用于皮肤2 h后,皮肤水分增加量最大为27.42%;皮肤暴露6 h后,经表皮水分散失量降至4.58 g/m2h。(4)CCK-8测定细胞毒性实验表明,CEP-2、CEP-2-13和CEP-2-17对HSF细胞和HaCaT细胞均有一定的增殖作用,且对HaCaT细胞的增殖作用更显著。质量浓度为80μg/mL的CEP-2-13对HaCaT细胞的增殖作用最强,细胞存活率为125.93%(p<0.001)。CEP-2和CEP-2-17对干燥损伤的HaCaT细胞的保护作用和修复作用相当,CEP-2-13对细胞的保护和修复效果最好,且修复作用强于保护作用。(5)ELISA试剂盒测定干燥损伤的HaCaT细胞内HA和AQP3含最的实验表明,CEP-2-13促进干燥损伤细胞产生HA和AQP3的能力强于CEP-2-17,且 CEP-2-13上调干燥损伤的HaCaT细胞中AQP3的能力大于HA,当CEP-2-13的质量浓度为100 μg/mL时,与对照组相比,HA含量增加了 91.68%,AQP3增加了 125.10%。