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研究背景:乳腺癌目前已经成为全球女性发病率和死亡率都很高的恶性肿瘤。目前,手术治疗、放疗、化疗和内分泌治疗是乳腺癌的常规治疗手段,但都因其各自的局限性而影响了治疗的有效性。因此,深入研究乳腺癌的生物学行为,发现新的治疗靶点,进而研究新的靶向治疗药物,有非常重要的意义。p16是一种重要的肿瘤抑制基因,其表达产物在细胞周期调控Rb通路中发挥负反馈作用。p16–cyclin Ds–CDK4/6–Rb–E2Fs通路异常是大多数肿瘤发生过程中的常见事件。分裂周期中的细胞在胞外有丝分裂原的刺激下首先表达D型细胞周期蛋白,该类蛋白能与CDK4/6结合并使Rb蛋白磷酸化,释放转录因子E2F,驱动细胞由G1期进入S期,促进细胞增殖。CDK4/6对Rb蛋白起到磷酸化作用,p16蛋白可以抑制该作用,使细胞无法由G1期进入S期,细胞增殖受到抑制。许多人类肿瘤中都发现p16蛋白表达缺失,但在另一些人类肿瘤如乳腺癌、卵巢癌以及HPV相关的鳞状细胞癌等中却发现了p16蛋白的表达上调。本课题组前期研究发现乳腺癌组织中p16蛋白表达水平上调,并且存在胞核到胞浆的表达易位。目前,有关其胞浆易位的机制尚不清楚。研究表明p16蛋白的锚蛋白重复序列可以通过静电引力与CDK4的R24相互作用。由此,我们推测乳腺癌组织p16蛋白胞浆易位可能与CDK4密切相关。因此,本研究将首先通过免疫组织化学方法检测乳腺癌组织p16及CDK4蛋白的表达情况,分析两者的亚细胞定位关系,并进一步通过组织免疫荧光双染技术加以证实,初步探讨乳腺癌组织p16蛋白胞浆异常表达与CDK4蛋白之间的关系。研究目的:初步探讨乳腺癌组织p16蛋白胞浆异常表达与CDK4蛋白之间的关系。研究方法:采用免疫组织化学染色方法,检测93例乳腺癌组织中p16蛋白及CDK4蛋白的表达及亚细胞定位,初步分析p16蛋白与CDK4蛋白的亚细胞定位关系并通过免疫荧光双染方法加以证实。研究结果:1.癌旁正常乳腺组织偶有个别细胞p16阳性表达,且主要定位于细胞核。而乳腺癌(乳腺浸润性导管癌)中p16蛋白的阳性着色率高达66.67%(62/93),并且主要表现为胞核/胞浆共同着色,甚至在某些病例中仅仅表现为胞浆着色,而胞核着色强度减弱甚至消失。进一步分析表明:p16蛋白阳性表达病例中核浆共阳性表达率为70.97%(44/62),胞浆阳性表达率为17.74%(11/62),而胞核阳性表达率仅为11.29%(7/62)。2.癌旁正常乳腺组织偶有个别细胞CDK4阳性着色,且主要定位于细胞核。而乳腺癌(乳腺浸润性导管癌)中CDK4蛋白的阳性着色率为84.95%(79/93),并且主要表现为胞核/胞浆共同着色,甚或仅有胞浆着色,胞核着色强度减弱或消失。进一步分析CDK4蛋白的亚细胞定位,我们发现,CDK4蛋白阳性表达病例中核浆共阳性表达率为56.96%(45/79),胞浆阳性表达率为26.58%(21/79),而胞核阳性表达率仅为16.46%(13/79)。3.乳腺癌组织中p16与CDK4蛋白的共阳性表达率为64.52%(60/93),并且60例共阳性表达病例中核浆共阳性表达的有37例(61.67%,37/60);胞浆共阳性表达的有11例(18.33%,11/60);胞核共阳性表达的有7例(11.67%,7/60);两种蛋白定位不一致的仅有5例(8.3%,5/60)。4.组织免疫荧光双染结果示:乳腺癌组织中p16及CDK4蛋白表达主要定位于胞核/胞浆,存在共定位关系。结论:1.乳腺癌组织中p16蛋白表达水平增高,主要表现为核浆共表达或仅胞浆表达。2.乳腺癌组织中CDK4表达水平增高,主要表现为核浆共表达或仅胞浆表达。3.乳腺癌组织中p16蛋白胞浆易位可能与CDK4有关。