【摘 要】
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目的:观察缺血后处理及水蛭注射液后处理对局灶性脑缺血大鼠磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号转导途径中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)mRNA及蛋白表达变化的影响,探讨其神经
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目的:观察缺血后处理及水蛭注射液后处理对局灶性脑缺血大鼠磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号转导途径中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)mRNA及蛋白表达变化的影响,探讨其神经保护的作用机理,以及两种干预措施之间是否有协同作用。
方法:采用随机分组对照实验,将50只大鼠随机分为五组,即假手术组(SO组)、缺血-再灌注对照组(C组)、缺血后处理组(P组)、水蛭注射液对照组(S-H组)、水蛭注射液后处理组(P-H组),每组10只。分别作如下处理:SO组:仅实施手术但不进行脑缺血操作,同时,腹腔注射生理盐水4ml;C组:实施90min的脑缺血和24h的再灌注,在再灌注即刻腹腔注射生理盐水4ml;P组:在再灌注即刻自CCA内抽出线栓30s,然后将线栓重新置入30s,反复进行此操作3次后进行再灌注24h,并在再灌注即刻腹腔注射生理盐水4ml;S-H组:在再灌注即刻,腹腔注射水蛭注射液4mg/kg(用生理盐水稀释至4ml),并自CCA内抽出线栓持续再灌注24h;P-H组:在P组操作的基础上,在再灌注即刻,腹腔注射水蛭注射液4mg/kg(用生理盐水稀释至4ml)。24小时后处死大鼠,取缺血侧大脑以作相关检测。24小时后参照Longa的5级评分标准对大鼠进行神经功能缺损评分,并采用荧光定量PCR(rt-PCR)的方法检查大鼠缺血半暗带PI3KmRNA表达量的变化,以及Westernblot法观察PI3K蛋白表达的变化。
结果:①缺血后处理能改善神经功(P<0.01),经过水蛭注射液后处理其神经功能得到进一步改善(P<0.05)。②PI3KmRNA的表达:P组、S-H组与C组比较,PI3KmRNA表达明显升高(P<0.05),而P-H组较P组进一步升高水平(P<0.01)。③PI3K蛋白的表达:SO组及C组有少量蛋白表达;P组、S-H组较C组蛋白的表达量增多(P<0.01),而P-H组较P组、S-H组明显升高(P<0.05)。
结论:①缺血后处理提高了PI3KmRNA及其蛋白的表达,可能是通过激活PI3K/Akt信号转导通路,发挥其神经保护作用。②水蛭注射液后处理较缺血后处理更进一步提高PI3KmRNA及其蛋白的表达,说明水蛭注射液和后处理有保护协同保护脑损伤的作用。
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