论文部分内容阅读
研究背景：近年来，随着人们生活水平的提高和生活方式的改变，高脂血症性急性胰腺炎患者呈逐年增多趋势，对于高脂血症，尤其是高三酰甘油血症诱发或加重急性胰腺炎的具体发病机制尚未完全阐明，临床诊断和治疗措施缺乏统一的指导方案。重症急性胰腺炎作为一种全身系统性疾病，常常在发病早期即出现严重的毛细血管内皮屏障功能障碍，毛细血管通透性升高导致的全身性毛细血管渗漏综合征的发生是诸多并发症的关键病理改变基础。水通道蛋白-1是第一个被发现的构成水转运通道与水通透有关的细胞膜转运蛋白，具有选择性介导细胞膜内外水转运的功能，对毛细血管内外水的转运起主导作用。这一发现极大地改变了人们对水进出细胞这一生理过程的认识，经细胞的水转运成为研究的热点。 随着现代科技的进步，传统中医中药以其独有的诊疗体系及独特的治疗效果成为当前胰腺炎研究的热点，其中大承气汤作为治疗急腹症的传统经典方剂，一直以来被视为急性胰腺炎治疗的基础方，通过对其加减运用，以达到辨证论治的治疗效果。现有诸多研究也证实其具有抵抗炎症因子的释放，减轻炎症损伤的作用，进一步鼓励我们从分子水平研究其发挥疗效的作用机制。因此，为深入研究高脂血症、高三酰甘油血症与重症急性胰腺炎的关系，我们分别建立了高脂血症、高三酰甘油血症及急性坏死性胰腺炎伴高三酰甘油血症大鼠模型，以探讨高脂血症及高三酰甘油血症诱发或加重急性胰腺炎的机制，以及中药治疗的效果及作用机制。 目的：建立高脂血症、高三酰甘油血症及急性坏死性胰腺炎伴高三酰甘油血症模型，为研究高脂血症及高三酰甘油血症对急性坏死性胰腺炎发病情况的影响奠定实验基础；探讨急性坏死性胰腺炎伴高三酰甘油血症对大鼠毛细血管内皮屏障功能的影响；从水转运通道的角度探讨水通道蛋白-1在急性坏死性胰腺炎伴高三酰甘油血症发病早期毛细血管内皮屏障功能障碍中的发生机制，并研究山楂承气汤对其治疗的效果及部分作用机制。 方法：(1)采用清洁级，雄性Sprague-Dawley大鼠30只，随机分为对照(Control)组、高脂血症(HL)组、商三酰甘油血症(HTG)组，每组10只，其中Control组采用均衡饲料喂养，其余两组均采用高脂饲料喂养。喂养四周，每隔一周称量体重，并分别于制模后6h、12h、24h经尾静脉取血，检测血清淀粉酶、三酰甘油、游离脂肪酸的含量：制模后24h每组处死8只大鼠，切取胰腺组织，采用HE染色法于光学显微镜下进行组织病理学检查及其病理损伤严重度评分。(2)采用清洁级，雄性Sprague-Dawley大鼠180只，随机分为对照(Control)组、高三酰甘油血症(HTG)组、急性坏死性胰腺炎(ANP)组、急性坏死性胰腺炎伴高三酰甘油血症(HANP)组、山楂承气汤治疗(HS)组、辛伐他汀联合奥曲肽治疗(HX)组，每组30只，其中Control组和SAP组采用均衡饲料喂养，其余四组均采用高脂饲料喂养。四周后进行制模，并分别于6h、12h、24h三个时间点处死各组大鼠，每个时间点8只，处死前1h经阴茎静脉注入2％EB染料。经腹主动脉取血，检测血清淀粉酶、TG、FFA、TNF-α、AQP-1的含量：切取胰腺、小肠、肺组织，采用HE染色法于光学显微镜下进行组织病理学检查及胰腺组织病理损伤严重度评分，并采用透射电镜技术观察胰腺组织毛细血管超微结构的变化；运用EB外渗法进行胰腺、小肠、肺组织毛细血管通透性测定；采用免疫组织化学法及免疫印迹法检测胰腺、小肠、肺组织中AQP-1蛋白表达情况；采用荧光定量PCR法检测胰腺、小肠、肺组织中AQP-1mRNA表达情况。 结果：(1)HL组、HTG组大鼠血清三酰甘油及游离脂肪酸水平在各时间点均较对照组升高，HTG组淀粉酶水平较HL组轻度升高(P<0.05)；病理观察显示，HTG组大鼠胰腺组织可见轻度水肿，有少量炎症细胞浸润；(2)ANP组、HTG组、HANP组大鼠血清TNF-α、TG、FFA含量较对照组明显升高(P<0.05)，HX和HS组血清TNF-α、TG、FFA含量在各时间点均显著低于HANP组(P<0.01)；与HX组相比，HS组各时间点血清TNF-α、TG、FFA降低显著(P<0.01)；另外，ANP组、HTG组、HANP组大鼠血清AQP-1含量较对照组明显降低(P<0.05)；与其他各组比较，HANP组大鼠血清AQP-1含量降低最为明显(P<0.05)；(3)病理观察显示，HANP组大鼠胰腺、小肠、肺组织病变较ANP组及HTG组加重，HS组病变较HANP组减轻，24h优于HX组(P<0，05)；组织病理损伤严重度评分结果与光镜下结果一致：(4)ANP组、HTG组、HANP组大鼠胰腺、小肠、肺组织毛细血管通透性显著高于对照组(P<0.01)，HS组大鼠胰腺、小肠、肺组织毛细血管通透性则明显低于HANP组及HX组(P<0.05)；(5)免疫组化及WB结果显示，ANP组、HTG组、HANP组大鼠组织AQP-1蛋白表达水平明显低于对照组，HS组AQP-1蛋白表达水平较HANP组和HX组有所提高(P<0.05)；(6)FQ-PCR结果显示，ANP组、HTG组、HANP组大鼠组织AQP-1mRNA表达水平明显低于对照组，HS组AQP-1mRNA表达水平较HANP组和HX组有所提高(P<0.05)。 结论：(1)采用高脂饲料喂养联合尾静脉注射TritonWR1339的方法可以成功制备高三酰甘油血症大鼠模型，高三酰甘油血症可直接诱发或加重急性坏死性胰腺炎大鼠模型的多脏器病理损伤；(2)在急性坏死性胰腺炎伴高三甘油血症大鼠模型发病早期存在严重的毛细血管渗漏，在加重多脏器病理损伤的过程中起重要作用；(3)水通道蛋白-1在急性坏死性胰腺炎伴高三酰甘油血症发病早期大鼠毛细血管内皮屏障功能障碍发生机制中起重要作用；(4)山楂承气汤可以有效改善急性坏死性胰腺炎伴高三酰甘油血症大鼠的生化及病理损伤情况，减轻组织毛细血管渗漏，纠正毛细血管内皮屏障功能障碍，其机制可能与上调水通道蛋白-1在组织毛细血管内皮细胞膜的表达有关。