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目的：
建立兔VX2乳腺癌动物模型,获得f-MSCT评价未经治疗的兔VX2乳腺癌血管生成特点,为本研究的接续实验提供依据和基础;应用免疫组化和Western blot两种方法评价兔VX2乳腺癌动物模型恩度、新辅助化疗及两种方案联合治疗的抗血管生成效果,初步探讨恩度、新辅助化疗和两种方案联合治疗的抗血管生成治疗的原因;用f-MSCT评价恩度、新辅助化疗和两种方案联合治疗的抗血管生成治疗效果,寻找评估恩度、新辅助化疗和两种方案联合治疗的抗血管生成治疗疗效的方法。
方法：
用VX2瘤株制备瘤细胞悬液注射在2只新西兰大白兔后肢股内侧区肌肉内制成传代兔,2周时于注射部位手术摘取已经形成的实性肿瘤,切取肿瘤边缘生长旺盛鱼肉样组织,剪成直径0.5mm～1mm制成组织块悬液。麻醉状态下将组织块悬液接种到94只纯种雌性新西兰白兔(月龄3～4个月;体重2.0～2.5 kg)乳腺区,种瘤后2周随机选取16只瘤兔进行论文第一部分实验研究:应用GE lightspeed16 CT灌注扫描,利用Perfusion3软件中的去卷积模型来计算四种灌注参数的灌注值即血流量(BF)、血容积(BV)、平均通过时间(MTT)和表面通透性(PS);之后16只荷瘤兔取瘤组织进行免疫组化检测MVD和VEGF表达。将剩余的78只荷瘤兔随机分四组用于论文第二、三部分实验研究:设对照组为生理盐水组18只给予生理盐水治疗,恩度组20只给予单纯恩度治疗:新辅助化疗组20只给予CEF(CTX,EPI,5-Fu)方案治疗:联合治疗组20只行恩度加新辅助化疗两种方案联合治疗。论文第二部分于各组治疗后CT灌注成像之后所有荷瘤兔手术取瘤组织,用免疫组化法检测MVD和VEGF,用Westernblot法检测VEGF的蛋白表达。论文第三部分各组荷瘤兔治疗前和治疗两周后分别行CT灌注成像检测BF、BV、MTT和PS。应用SPSS13.0软件包采用t检验、方差分析、析因分析及相关分析等方法进行统计学处理,P＜0.05水平为有统计学意义。
结果：
1、论文第一部分16只兔种瘤2周后成瘤率达100％。兔VX2乳腺癌模型肿瘤CT灌注参数.BF、BV和PS均值明显高于肌肉组织,而MTT低于肌肉组织;两组间的BF、BV、MTT及PS具有显著性差异(P＜0.01);其免疫组化检测MVD平均值为283.45±8.04;VEGF表达为7.33±0.27;本组实验中兔VX2乳腺癌组织的CT灌注参数BF、BV和PS与MVD和VEGF表达间呈正相关,而MTT与MVD和VEGF表达之间呈负相关。
2、论文第二部分本部分免疫组化检测MVD和VEGF表达结果:新辅助化疗组、恩度组、联合治疗组和生理盐水组的MVD和VEGF两两比较均有显著性差异(P＜0.01),表现为联合治疗组均值最低,恩度组居中,新辅助化疗组较高,生理盐水组最高,表明生理盐水组、新辅助化疗组、恩度组及联合治疗组MVD和VEGF有依次递减的趋势。析因分析发现联合治疗组的作用最强,表明恩度和新辅助化疗药联合应用具有协同作用;Western blot检测结果:生理盐水组、新辅助化疗组、恩度组及联合治疗组VEGF蛋白表达的灰度值依次减低。
3、论文第三部分生理盐水组、新辅助化疗组、恩度组及联合治疗组治疗后CT。灌注获得的参数BF、BV、PS均值较治疗前明显减低,而MTT均值较治疗前增大,差异有统计学意义(P＜0.01);方差分析和q检验进行对比分析,结果表明新辅助化疗组、恩度组、联合治疗组和生理盐水组的BF、BV、MTT及PS两两比较均有显著性差异(P＜0.01),表现为联合治疗组BF、BV和PS均值最低,MTT均值最高;恩度组BF、BV和PS均值高于联合治疗组,MTT均值低于联合治疗组;而新辅助化疗组BF、BV和PS均值高于恩度组,MTT均值低于恩度组;以上三组BF、BV和PS均值均低于生理盐水组,MTT高于生理盐水组。表明生理盐水组、新辅助化疗组、恩度组、联合治疗组的BF、BV和PS均值依次递减,而MTT均值依次增高。各组治疗后的灌注参数BF、BV、PS均值与其治疗后MVD和VEGF表达的均值呈正相关,而MTT均值与治疗后MVD和VEGF表达的均值呈负相关(P＜0.01)。
结论：
1、兔VX2乳腺癌动物模型可以作为CT灌注评价肿瘤血管生成的实验研究,f-MSCT可以评价未经治疗的兔VX2乳腺癌肿瘤血管生成。
2、恩度单药治疗兔VX2乳腺癌,可使肿瘤内MVD和VEGF表达显著减低,发挥抗血管生成作用;恩度与CEF新辅助化疗方案联合应用治疗兔VX2乳腺癌产生了抗血管生成的协同作用;CEF新辅助化疗对兔VX2乳腺癌也有抗血管生成作用。
3、f-MSCT能够间接反映兔VX2乳腺癌恩度、新辅助化疗和两种方案联合治疗后肿瘤微血管生成的变化及免疫组织化学和分子水平VEGF蛋白表达的变化,f-MSCT可作为在体、无创评价恩度、新辅助化疗和两种方案联合治疗兔VX2乳腺癌抗血管生成疗效的方法。