为满足感冒患者中特殊人群(如糖尿病、肥胖症等人群)的需求,在目前已上市的以蔗糖为辅料的含蔗糖型感冒灵颗粒(注：本文以下所述“感冒灵颗粒”或“感冒灵冲剂”均为以蔗糖为辅料的含蔗糖型感冒灵颗粒)的基础上,开发无蔗糖型感冒灵颗粒——感冒灵颗粒(无蔗糖)。按照现行版《药品注册管理办法》的要求开展了感冒灵颗粒(无蔗糖)的药学研究和药效学研究。药学研究包括制剂工艺研究和质量标准研究。按照确定的工艺参数和工艺流程及所制订的质量标准,连续放大生产了三批中试样品并按照质量标准进行检测。成品率达到90%以上、颗粒所含水分均低于1.5%,颗粒均匀、色泽一致,溶化性合格,微生物限度合格；对乙酰氨基酚、咖啡因、马来酸氯苯那敏薄层色谱鉴别专属性强,对乙酰氨基酚、咖啡因、马来酸氯苯那敏、蒙花苷的高效液相色谱法含量测定均符合质量标准,三批中试样品6个月内性状、鉴别、含量等均稳定。制剂工艺研究在不改变感冒灵颗粒的中药、化药处方组成及处方量,不改变处方中的中药三叉苦等四味的提取、醇沉、浓缩等工艺制成流浸膏的基础上,将感冒灵颗粒的湿法制粒成型工艺改为一步制粒成型工艺,以颗粒的成型率、水分、溶化性、堆密度、吸湿性、临界相对湿度、单剂量等为考察指标,通过对不同辅料进行筛选,确定以乳糖等作为辅料而取代感冒灵颗粒中的蔗糖,并确定了辅料乳糖的加入量,制成感冒灵颗粒(无蔗糖),而且为了增加患者用药的顺应性,进行了口感和气味的调节,通过加适量的甜菊素掩盖处方中中药及化学药品的苦涩味道,为防止制备过程中因物料受热而使薄荷油挥发损失,在颗粒制备完成后、内包装前,将处方中的薄荷油溶于乙醇中而均匀喷雾加入干燥颗粒中,便于感冒患者用开水冲服时有薄荷芳香的舒适感。其一步制粒成型工艺为：以处方中的化药及乳糖等辅料,在一步制粒机中充分混合均匀后作底料,继而喷以四味中药的流浸膏,一步制粒成型制成颗粒。用单因素考察实验确定了流浸膏喷雾时的相对密度、物料温度,并用单因素考察实验和L9(33)正交试验研究方法,对感冒灵颗粒(无蔗糖)一步制粒的工艺参数进行了优选研究,确定了最佳的喷雾速度、雾化压力、进风温度。其一步制粒法的最佳参数为：四味中药流浸膏的相对密度为1.22(60℃),喷雾速度5g/min,雾化压力3bar,进风温度75℃,物料温度控制在50～60℃,在此条件下,颗粒成型率高达96%,颗粒的临界相对湿度为72%,单剂量为2.5g,其2.5g颗粒中乳糖约为1.2g(占48%)。最终确定感冒灵颗粒(无蔗糖)的制备工艺为：称取三叉苦491g、金盏银盘327g、野菊花246g、岗梅736g,合并,加水煎煮二次,每次2小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩至相对密度为1.10(60℃)的清膏,放冷至室温,加入乙醇使含醇量达60～65%,静置过滤,滤取上清液,回收乙醇,浓缩至流浸膏的相对密度为1.22(60℃),得四味中药的流浸膏；称取对乙酰氨基酚20g、咖啡因0.4g、马来酸氯苯那敏0.4g、乳糖约120g、甜菊素约2.5g,置一步制粒机中混合均匀,作为底料,喷以四味中药的流浸膏,一步制粒成型,得颗粒约250g,均匀喷雾乙醇溶解的薄荷油0.2ml,筛去细粉和粗颗粒后,包装即得。质量标准研究感冒灵颗粒(无蔗糖)的制剂工艺完善后,按照药品注册管理办法的技术要求,建立了该制剂的质量标准。1、定性研究：用薄层色谱法对对乙酰氨基酚、咖啡因、马来酸氯苯那敏进行了定性研究,以三氯甲烷-甲醇-丙酮-浓氨溶液(18：3：2：0.024)为展开剂,置紫外光灯(254nm)下检视,供试品色谱中,在与对乙酰氨基酚、马来酸氯苯那敏、咖啡因对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点。2、定量研究：用高效液相色谱法对对乙酰氨基酚、咖啡因、马来酸氯苯那敏、蒙花苷进行了定量分析研究：(1)采用色谱柱Thermo electron corporation hypersil gold C18 (4.6mm×150mm,5μm),以乙腈-0.5%磷酸(用三乙胺调至pH2．1)(6：94)为流动相,流速1.0mL·min-1在264nm处检测咖啡因和马来酸氯苯那敏,在244nm处检测对乙酰氨基酚。方法学研究结果表明对乙酰氨基酚、咖啡因和马来酸氯苯那敏线性范围分别为0.324～1.136ug (r=0.9999)、0.192～0.673μg (r=0.9999)、0.175～0.614μg (r=0.9998);平均回收率(n=9)分别为104.21% (RSD=0.92%)、98.56%(RSD=1.90%)、98.58%(RSD=1.30%)。根据十批样品含测结果,本品每袋含对乙酰氨基酚(C8H9NO2)暂定为标示量的90.0%～110.0%,咖啡因(C8H10N4O2)暂定为标示量的85.0%～115.0%,马来酸氯苯那敏(C16H19ClN2·C4H4O4)暂定为标示量的85.0%～115.0%。(2)采用色谱柱Kromasil 100-5 C18柱(4.6mm×250mm,5μm),以甲醇-0.1%磷酸水溶液(48：52)为流动相,流速1.0ml·min-1,在334nm处检测蒙花苷。方法学研究结果表明蒙花苷进样量在0.041～0.367μg范围内,与峰面积呈良好的线性关系(r=1),平均加样回收率(n=9)为98.06%(RSD=1.16%)。根据十批样品含测结果,本品每袋含野菊花以蒙花苷计,暂定不得少于4.5mg。3、稳定性研究：6个月的稳定性试验的各项指标结果表明,6个月后长期试验的结果与零月相比各项指标无明显差异,6个月后加速试验的结果与零月相比各项指标无明显差异,说明感冒灵颗粒(无蔗糖)放置6个月稳定。药效学研究本研究以小鼠、大鼠和家兔为试验对象,采用冰醋酸引起小鼠扭体反应实验、大鼠角叉菜胶引起的足趾肿胀实验、小鼠迟发型超敏反应、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红细胞能力测定、内毒素引起家兔发热实验共5种方法,以感冒灵颗粒、莲花清瘟胶囊作为对照品,对感冒灵颗粒(无蔗糖)进行了药效学研究。其药效学试验结果：1、感冒灵颗粒(无蔗糖)对小鼠腹腔注射冰醋酸诱发的疼痛有抑制作用,感冒灵颗粒(无蔗糖)10倍人用剂量组可抑制由冰醋酸诱发的小鼠扭体反应,使小鼠发生扭体反应的潜伏期延长(698.82±298.16秒,P＜0.001),10倍人用剂量组可抑制由冰醋酸诱发的15分钟内的扭体次数减少(P＜0.001)。2、感冒灵颗粒(无蔗糖)5倍人剂量组在致炎后的0.5hr对角叉菜胶所致大鼠足趾肿胀有抑制作用(p＜0.05)；10倍人剂量组在致炎后的2hr、4hr、6hr对角叉菜胶所致的炎症有抑制作用(p＜0.05)。3、使用5倍、10倍人用剂量的感冒灵颗粒(无蔗糖)对DNFB诱发的小鼠迟发型过敏反应引起的耳肿胀和脾指数有一定的抑制作用趋势,但没有明显统计学意义。感冒灵颗粒(无蔗糖)5倍人用剂量对小鼠的胸腺指数有抑制作用并有统计学的意义。4、2倍、5倍、10倍人用剂量的感冒灵颗粒(无蔗糖)对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的能力有提高(p＜0.05)。5、各组家兔注射内毒素后1小时体温高于注射内毒素前,感冒灵颗粒(无蔗糖)5倍、10倍人用剂量对静脉注射内毒素20u/kg引起的家兔发热作用,在注射内毒素1小时时间点有抑制作用(P＜0.01,P＜0.001)；5倍、10倍人用剂量在注射内毒素2小时时间点有抑制作用(P＜0.001)。6、感冒灵颗粒(无蔗糖)与感冒灵颗粒比较,在相同剂量下以上各项指标没有明显差异。通过上述研究可得出结论：采用一步制粒技术制备感冒灵颗粒(无蔗糖),生产工序简单、速度快、物料混合均匀、药物受热时间短、高产出低能耗,制得的颗粒疏松均匀、色泽一致、流动性好、稳定性好不易吸湿、易于溶化,且减少了赋形剂辅料的用量,单剂量由含蔗糖型的10g减少到无蔗糖型的2.5g,贮存、携带、服用方便,其制剂中完全不含蔗糖,适宜于禁蔗糖的感冒患者。质量标准中对乙酰氨基酚、咖啡因、马来酸氯苯那敏薄层色谱无阴性干扰、专属性强,对乙酰氨基酚、咖啡因、马来酸氯苯那敏、蒙花苷的含量测定方法均准确、灵敏、重现性好、专属性强,三批中式样品在六个月内稳定,可用于感冒灵颗粒(无蔗糖)的质量控制。感冒灵颗粒和感冒灵颗粒(无蔗糖)均具有解热镇痛作用；对由角叉菜胶引起的大鼠炎症也有拮抗作用；对小鼠迟发型超敏反应有一定的抑制作用；对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红能力有促进作用；对由内毒素引起的家兔发热有一定的拮抗作用。在相同剂量下,两者没有明显差异。