从50株不同种属的酿酒酵母中筛选出一株生物量及SOD含量均较高的酵母菌B94,以其为出发菌进行了原生质体紫外线诱变,亚硝基胍及⁶⁰CO-γ射线复合诱变育种,结果得到了一株高产突变株CNU94,其SOD含量为1872u/g湿菌体,较出发菌提高134%,且遗传性能稳定,是—株有生产潜力的高产SOD菌株。 对突变株CNU94的发酵工艺条件进行了正交试验及单因子条件实验,确定了其发酵产酶的优化培养条件为:培养基组成为葡萄糖2%,蛋白胨2%,酵母膏1%,7°Be麦芽汁9%（V/V）,CuSO₄75mmol/ml,ZaSO₄25mmol/ml,pH5.5,摇瓶装量为75ml/500ml三角瓶,接种量15%,培养20小时加H₂O₂至终浓度为1%,继续培养至24小时。在此条件下,细胞生物量为5.26g/100ml,SOD含量为2662u/g湿菌体,SOD产量为14002u/100ml,产量较出发菌提高99%。 酿酒酵母CNU94经发酵培养后,离心收集菌体,将菌体用甲苯法破壁得到粗酶液,粗酶液经50℃加热,调节pH除杂蛋白,丙酮分级沉淀后,上DEAE纤维素-32柱层析四步纯化工艺,可得到纯化的SOD,其比活为3500u/rag,收率为58.3%,纯化倍数为30.43倍。PAGE电泳后的活性染色结果显示,酵母超氧化物歧化酶具四条同功酶,蛋白染色结果显示酶纯度已达电泳纯。该酶经酶类型鉴定为Cu/ZnSOD。