吸水链霉菌应城变种10-22的一段基因组序列的研究—基因组文库粘粒(cosmid)pHZ1392中插入片段的序列测定、注释和部分基因功能的鉴定

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吸水链霉菌应城变种10-22可以产生5102-Ⅰ,5102-Ⅱ,5102-Ⅲ等多种抗生素,其中5102-Ⅱ是一种多肽类抗生素,对玉米小斑病菌、稻瘟病菌等多种病原真菌具有明显的抑制作用.在过去的研究中曾报道10-22基因文库中的一个粘粒—pHZ1392可能含有完整的5102-Ⅱ抗生素合成基因簇,如果以pHZ1392转化变铅青链霉菌ZX64,可以使该宿主菌获得对玉米小斑病菌的抗性.该实验室通过shot-gun方法构建随机文库,辅助以定位克隆和引物延伸等手段对pHZ1392进行序列测定,获得了全长为40.2Kb的DNA序列,其中36.7Kb属于吸水链霉菌应城变种10-22基因组.对这段DNA序列进行系统性的同源序列比较分析,发现其至少含有25个比较确定的CDS,这些CDS多数编码的是调节基因和氧化还原酶类,另外还有P450,ABC转运系统等与次级代谢有关的基因.通过基因敲除和体外分析等方法还对其他一些可能和抗生素合成有关的CDS进行了研究,比如构建了编码Sensor-Kinase的ORF3的基因缺失株S3K和编码efflux蛋白的ORF19(hmr19)的基因缺失株EAK,并且以大肠杆菌为宿主进行了重组表达等研究.
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