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目的: 利用具有良好生物相容性的泡沫碳化硅修复兔下颌骨骨缺损,平行和聚焦两种低强度脉冲超声波分别辐照术区,对比研究两种不同超声波辐照对兔下颌骨人工植入材料内骨生成量的影响。 材料与方法: 1、实验材料与动物 泡沫碳化硅(α+β-SiC),孔径为1mm,孔隙率为80%,规格10mm×5mm×4mm,高温高压后备用。 选用60只健康成年大耳白兔,雌雄不限,体重2-3kg,所用动物均独立喂养,观察一周后将健康动物用于实验。 2、体内组织温度检测实验 大耳白兔全身麻醉后,于下颌骨下缘切开皮肤,长度为1-2 cm,钝性分离至骨面。温度测量仪的热电偶探头分别置于表皮下和下颌骨面。两个位置的初始温度与室温一致时,超声加载连续测温20 min。低强度脉冲超声平行波强度为30mW/cm2,低强度脉冲超声聚焦波强度为300 mW/cm2。 3、植入方法及术后超声波辐照 大耳白兔全身麻醉后,于下颌骨下缘切开皮肤,长度为3-4 cm,钝性分离至骨面,嵌入事先准备好的模板,制备全层骨缺损模型,植入泡沫碳化硅,关闭切口。术后连续3d肌肉注射抗菌素。术后第1d开始常规全麻下,进行术区的超声波辐照。低强度脉冲超声平行波组参数:频率1.5MHz、强度30 mW/cm2、脉冲宽度200μs、脉冲周期1kHz、20min/次、1次/d;低强度脉冲超声聚焦波组参数:频率1.5MHz、强度300 mW/cm2、脉冲宽度200μs、脉冲周期1kHz、20min/次、1次/d、焦斑大小10mm×8mm、焦距8 mm;对照组:不开功率源的假辐照。 4、Micro-CT扫描 在3w、6w和9w时,将动物处死,取带植入材料的骨组织块4%多聚甲醛固定,进行Micro-CT扫描获取二维数据。 5、不脱钙硬组织切-磨片制作及染色 在3w、6w和9w时,将动物处死,取带植入材料的骨组织块,经固定、脱水、浸润、包埋制成塑料包埋块。再使用硬组织切片机制成70-80μm的切片,并使用砂纸逐级磨片至30-40μm,分别用甲苯胺蓝和亚甲基蓝-酸性品红染色。 6、骨组织形态学观察 Mimics软件三维重建图像和光学显微镜下观察材料内骨生长情况。 7、骨组织形态计量分析 对Micro-CT扫描数据、甲苯胺蓝染色、亚甲基蓝-酸性品红染色的结果进行定量分析并计算成骨面积,评价两种低强度脉冲超声辐照后的材料内骨长入和形成情况。所有数据均用(x)±s表示,组间比较采用单因素方差分析和LSD-t检验,统计学检验均使用SPSS13.0统计分析软件,检验水准α=0.05。 结果: 1、体内组织温度检测实验 在兔下颌骨表皮下组织和下颌骨骨面连续测温20 min后,低强度脉冲超声平行波组温度浮动分别是0.9℃以内和0.6℃以内,低强度脉冲超声聚焦波组分别是0.9℃以内和0.8℃以内。 2、骨组织形态学观察 (1) Micro-CT扫描:通过3D重建图可见随着时间的延长,材料内新生骨组织量逐渐增大。相同时间点的超声组大于对照组,聚焦波组大于平行波组。 (2)甲苯胺蓝染色:随着时间的延长,材料内骨组织面积逐渐增大,相同时间点的超声组大于对照组,而两组超声组之间未见明显差异。随着时间的延长,骨组织的结构越来越成熟。相同时间点超声组与对照组相比新生骨组织更加成熟,而两组超声组之间骨成熟程度未见明显差异。 (3)亚甲基蓝-酸性品红染色:随着时间的延长,材料内骨组织面积逐渐增加,相同时间点的超声组大于对照组,而两组超声组之间未见明显差异。随着时间的延长,骨组织的结构越来越成熟。相同时间点超声组与对照组,即三组间骨成熟程度未见明显差异。 3、骨组织形态计量分析 Micro-CT扫描、甲苯胺蓝染色、亚甲基蓝-酸性品红染色图像的计算结果一致:随着时间的延长,材料的成骨面积逐渐增加。在3w、6w及9w时,相同时间点的超声组成骨面积高于对照组,具有统计学差异(p<0.05),超声组中低强度脉冲超声聚焦波组明显高于平行波组(p<0.05) 结论: 1、低强度脉冲超声平行波、低强度脉冲超声聚焦波均可以增加兔下颌骨人工植入材料内骨生成量。 2、超声强度为300mW/cm2的聚焦波对骨生成的促进作用明显高于30mW/cm2的平行波。其中对植入材料舌侧区域骨量的增益是造成近中、远中、上面这几个方位上聚焦波组的新生骨量明显高于平行波组和对照组的主要原因。