樟子松外生菌根异柠檬酸脱氢酶的表达分析及酶学性质研究

来源 :内蒙古农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:laowangtou2
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
异柠檬酸脱氢酶在三羧酸循环循环中是一个重要的限速酶,是研究蛋白质功能关系以及酶的催化与调节机制的最佳模型。本试验通过人工合成樟子松与褐环乳牛肝菌外生菌根共生体系,首次采用物理纯化方法纯化分离了樟子松菌根组织、根组织以及褐环乳牛肝菌纯培养菌丝组织中的异柠檬酸脱氢酶(IDH),测定其酶学性质,并利用实时荧光定量测定 IDH相对表达量。为今后对樟子松菌根组织中IDH的功能及代谢关系的进一步研究提供理论依据。  通过物理方法纯化后的IDH经SDS-PAGE检测,结果显示纯化后的目的蛋白均为单一条带,且菌根、根和真菌组织中IDH的亚基大小约为46kD左右。菌根、根和真菌组织中IDH酶动力学参数结果为NADP-IDH对NADP+的Km值分别为10.7μM、11.4μM和22.1μM,对底物异柠檬酸的Km值分别为71.7μM、79.3μM和87.8μM,最适pH分别为8.2、8.0和7.5,最适温度分别为45℃、45℃和42℃。金属离子依赖性结果表明三种来源的IDH是典型的二价金属阳离子依赖型IDH,Mn2+是樟子松菌根组织及根组织IDH的最强激活剂。实时荧光定量结果表明,樟子松菌根组织中IDH基因的相对表达量高于根组织。基于本试验结果分析得出,外生菌根真菌可极大提高宿主植物体内IDH的活性和基因表达量以及改变酶的相关性质,为进一步解释外生菌根改善宿主植物生长状况提供生化与分子理论基础。
其他文献
隐花色素是植物的一类重要蓝光受体,它通常由一个小的基因家族编码。在本研究中,通过综合运用简并引物PCR、Southern杂交和生物信息学方法,揭示了小麦CRY基因家族的组成为CRY1a,C
聚羟基烷酸酯(Polyhydroxyalkanoic,简称PHA),是目前世界上发现的唯一由微生物完全合成的一种热塑性生物高分子材料。PHA与化学合成塑料相比,除具有良好的热塑性、易加工成型、
本实验分别以江西农业大学自选的恢复系昌恢121,昌恢606,昌恢891,昌恢T025选作为母本,以华中农业大学提供的转基因恢复系明恢63Cry1C,63Cry2A,明恢63Cry1C+2A,明恢63Cry1Ab+2A,明恢63Cry1Ab+1C为父本,经人工杂交得到F1,并分别以昌恢121,昌恢606,昌恢891,昌恢T025为轮回亲本进行回交。回交7次,再自交两次,在此过程中采用试纸条法,室内人
昌恢T025是优异的籼稻恢复系,亦是超级稻品种五丰优T025的父本;Habataki是从日本引入的优良籼稻品种,二者杂交存在明显的杂种优势。为挖掘Habataki与昌恢T025杂交中的优势位点,本
昆虫杆状病毒表达系统(BEVS)作为一种优秀的真核细胞表达系统,具备插入大片段外源基因的能力。同时昆虫杆状病毒表达系统所产生的蛋白与人体蛋白的表达修饰(磷酸化),生物活性及
L-阿拉伯糖异构酶(L-Arabinose Isomerase,L-AI)是生物法异构化D-半乳糖为D-塔格糖的关键酶。本研究从腌菜和泡菜中分离出一批乳酸菌,经纸色谱法初筛和改良半胱氨酸咔唑法复筛,获得1株粗酶酶活达13.95U/m L的高产D-塔格糖的乳酸菌,通过NCBI进行16S rDNA序列比对及生化特征分析,鉴定其为植物乳杆菌并命名为WU14。上传这株菌株部分16S rDNA基因序列至NC
核受体(nuclear receptors,NRs)是配体依赖性转录因子,通过与配体结合而调控基因表达,它们是一类扩散并能与特异性配体结合的细胞内信号蛋白。核受体(NRs)对机体的生长发育、分化
蛋白质的相互作用是蛋白质执行其生物学功能的分子基础,研究蛋白质的相互作用,可以提高我们对代谢调控和生理过程的认识和理解。目前所采用的研究蛋白相互作用的方法包括酵母双
本研究通过人工气候箱中模拟天山云杉种子萌发和幼苗生长的条件,在对天山云杉凋落物和针叶水提取物乙醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取物进行生物测定的基础上,采用柱层析分离、GC-MS-
CO在哺乳动物研究中被认为是一种调控一系列生理过程的重要内源气体信号分子,并且这些调控过程往往是通过NO信号来介导,但CO在植物逆境响应方面研究还比较少。本研究发现150 mM NaCl胁迫以时间进程方式诱导了小麦幼苗根部CO合成酶-血红素加氧酶(HO EC 1.14.99.3)活性上升并导致内源CO含量增加。继而用外源CO处理来模拟内源CO的变化,我们发现外源50%饱和溶液与150 mM NaC