论文部分内容阅读
股骨头坏死中医证型的分型一直缺乏有力的直接证据加以证实,难以做到真正意义上的客观化和量化,本研究有望可为股骨头坏死中医证型的分型提供科学依据。不同证型的软骨细胞的表型不同,通过对MAPKs信号差异的研究,本研究希望望部分解决股骨头坏死中医证型的本质所在。目的:建立不同证型股骨头坏死患者的软骨细胞体外培养体系,利用基因组学和蛋白质组学技术,探讨不同证型软骨细胞的MAPKs信号差异,挖掘出来的一个综合征相关标记物的共同特征,提供客观、的本质及股骨头坏死的中医证型合理分类研究的定量依据。方法:收集股骨头坏死的患者共30例,并按照脉络瘀阻型以及肝肾亏虚型进行辨证分型和分组(各15例)。患者行全髋关节置换术,术中收集不同证型的软骨,进行软骨细胞体外培养,并进行增值及凋亡的检测。不同证型关节软骨细胞中MMP-1/-13mRNA的分析使用实时定量PCR和western blot法检测MMP-1和MMP-13在不同证型中mRNA和蛋白表达的变化,并建立相应的蛋白图谱。不同证型关节软骨细胞中MAPKs信号通路差异分析研究不同证型关节软骨MAPKs信号通路蛋白,包括ERKI/2,JNK,P38激酶以及其磷酸化状态的表达情况,评价在不同证型中MAPKs的功能表现。生物信息点的获取和对研究结果的整理通过对比分析、因子分析、化学计量学等技术手段,对不同证型的表达图片进行分类搜寻生物信息点,探索MAPKs信号差异与股骨头坏死中医证型的相互关系。结果:肝肾亏虚型组中MMP-1/-13RNA在目标基因的表达方便均明显小于脉络瘀阻型组。这表明在基因表达方面两种证型之间存在明显的差异。在质谱分析中呈现出均非一致的蛋白。结论:经实验结果提示的明显差距,为股骨头坏死中医证型的分型的进一步研究提供了新的思路,并可成为日后大样本开展实验研究的“预实验”根据。