β-推进器植酸酶Bap2062的克隆表达及应用

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背景和目的:植酸酶能够在温和的条件下水解植酸,释放磷酸基团。因此,这类酶被广泛应用于动物饲料中,用来减轻植酸的抗营养作用,以及减少动物排泄物中的植酸含量,减少环境污染。与目前应用广泛的组氨酸酸性植酸酶相比,β-推进器植酸酶具有更好的热稳定性和耐碱性pH属性,可以在肠道中发挥作用。本课题对来自于Bacillus amyloliquefaciens DSM7的β-推进器植酸酶Bap2062进行了克隆表达、性质、表征及应用性检测,为β-推进器植酸酶的商业应用提供了新的选择。实验方法:以Bacillus amyloliquefaciens DSM7基因组为模板,通过PCR的方法获取Bap2062基因序列,以pET22b为载体构建重组质粒,并在E.coli transetta(DE3)中诱导表达,纯化后对Bap2062的酶学性质进行表征。结果:通过PCR钓取了目的基因序列,并成功构建了重组质粒pET22b-bap2062,性质表征结果显示Bap2062最适温度为75℃,最适pH为6.5,Km、kcat分别为7.02 mM和156.51 s-1,对玉米粉、大豆粉中的植酸具有良好的水解作用。结论:本实验成功构建了重组质粒pET22b-bap2062,并在大肠杆菌表达体系中成功表达,经过两步纯化后得到电泳纯蛋白,酶学性质研究显示其具有良好的热稳定性及催化活性。
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