【摘 要】
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目的:在分子实验的基础上,从动物整体水平上评估shADAM8及shEGFR在关节软骨损伤及修复上的治疗作用,验证靶向抑制ADAM8及EGFR改善软骨退变的分子机制,为下一步关节炎治疗奠定药物基础。方法:1.关节炎模型建立2.转染大鼠关节炎模型(1)正常关节组:不予特殊处理(2)单纯碘乙酸(空白对照组):关节腔内注入0.2ml 0.9%Nacl溶液(3)rAd-col2A1-shRNA-ADAM8干
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目的:在分子实验的基础上,从动物整体水平上评估shADAM8及shEGFR在关节软骨损伤及修复上的治疗作用,验证靶向抑制ADAM8及EGFR改善软骨退变的分子机制,为下一步关节炎治疗奠定药物基础。方法:1.关节炎模型建立2.转染大鼠关节炎模型(1)正常关节组:不予特殊处理(2)单纯碘乙酸(空白对照组):关节腔内注入0.2ml 0.9%Nacl溶液(3)rAd-col2A1-shRNA-ADAM8干扰组;造模后右后侧膝关节腔内注射1.6×10~8pfu/ml rAd-col2A1-shRNA-ADAM8重组腺病毒0.2ml。(4)rAd-col2A1-shRNA-EGFR干扰组;造模后右后侧膝关节腔内注射1.6×10~8pfu/ml rAd-col2A1-shRNA-EGFR重组腺病毒0.2ml。(5)空病毒注射组(阴性对照组);照模后右后侧膝关节腔内注射1.6×10~8pfu/ml腺病毒空载体0.2ml3.指标检测:(1)一般情况观察;动物生命体征,生活习惯和有无步态改变,观察切口愈合情况,有无红肿、感染。(2)大体标本观察;膝关节囊有无痉挛、粘连和新生物形成;滑膜有无充血、水肿和滑液增多;软骨有无侵蚀、关节面边缘有无骨赘形成、半月板损伤等骨性关节炎改变;修复组织的平整性、光泽度、颜色和周围组织的结合情况。(3)病理学检查;通过苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色,观察滑膜及软骨组织学形态,是否被炎症细胞浸润;通过番红0-固绿染色及甲苯胺蓝染色观察软骨细胞形态及骨关节炎的病理学机制;通过免疫组化染色(Immunohistochemistry,IHE)观察CollagenⅡ、Aggrecan及MMP-9的表达。(4)QPCR检测:基因水平用QPCR检测,分析ADAM8、EGFR、MMP-9、CollagenⅡ、Aggrecan表达情况,并分析它们之间的关系,验证shADAM8及shEGFR改善软骨退变的分子机制,通过SPSS1 9.0软件进行分析,采用单因素方差分析比较各组之间的差异,以P<0.05分析是否具有统计学意义。结果:骨关节炎的病理学机制是细胞外基质的降解大于合成,给药组与空白对照组相比,ADAM8、EGFR、MMP-9水平均较空白对照组低,Arrencan和CollagenⅡ水平均升高且有统计学意义(P<0.05)。结论:1.本实验在骨关节炎模型中,ADAM8、EGFR、MMP-9的表达增高,并与骨关节炎的严重程度成正相关,其结果与分子实验相符合。2.本实验在动物模型上验证了前期分子实验所发现的新的通路,ADAM8的所产生的配体与EGFR相结合通过p38 MAPK通道进而调节MMP-9的产生,从而对细胞外基质产生降解,引起软骨细胞的凋亡。3.抑制ADAM8或EGFR可以延缓骨关节炎的产生
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