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目的:本实验利用大鼠慢性鼓膜穿孔模型,观察血竭蜈蚣油对大鼠慢性鼓膜穿孔愈合的影响,探讨血竭蜈蚣油对大鼠慢性鼓膜穿孔修复的可行性,为药物的临床应用提供理论基础及实验依据。 方法:1.建立SD大鼠(Sprague Dawley大鼠)慢性鼓膜穿孔模型:SD大鼠35只,其中5只为正常对照组。余30只大鼠水合氯醛腹腔注射麻醉(100mg/kg),消毒外耳道,在手术显微镜下,用灼热尖针灼烧大鼠双侧鼓膜紧张部,制成约占鼓膜面积80%的穿孔。每周在手术显微镜下观察鼓膜穿孔愈合情况,对于穿孔面积小于50%的再次扩大到80%,计时自最后一次手术后开始。为预防鼓膜感染,每次术后肌注氨苄青霉素(150mg/kg)、0.25%氯霉素眼药水滴耳,1次/天,连续1周。术后第8周在手术显微镜下选取鼓膜紧张部穿孔超过50%面积且稳定的慢性穿孔;2.实验处理:规定左耳为血竭蜈蚣油组,右耳为模型组。在手术显微镜下,使用尖针祛除鼓膜穿孔边缘陈旧性组织,搔刮穿孔内侧面,制造新鲜创面,然后在鼓膜上放置2平方毫米棉片,血竭蜈蚣油组滴1g/ml血竭蜈蚣油溶液0.1ml,每周更换药棉3次,滴1g/ml血竭蜈蚣油1次/天;模型组滴等容积0.1ml的注射用甘油。术后肌肉注射氨苄青霉素(150mg/kg)1次/天,连续1周。每次更换药棉时手术显微镜观察鼓膜愈合情况,鼓膜穿孔快愈合时每天观察1次,记录鼓膜穿孔愈合时间,用耳内镜拍照。2个月后过量麻药处死大鼠,解剖取出颞骨,浸入10%甲醛中固定24h,取下听泡,强酸脱钙,取鼓膜及鼓膜附着处组织,切片,常规HE染色,光镜检查。正常对照组、模型组及血竭蜈蚣油组三组随机各取8张片,放大400倍用显微镜目镜度量格测定观察鼓膜各层厚度。两组鼓膜穿孔愈合率差异比较采用四格表资料的卡方检验完成,愈合时间比较采用T检验,三组鼓膜总厚度运用单因素方差分析后行两两比较,统计分析过程均由医学统计软件SPSS19.0完成。 结果:1.手术后第8周,有46耳(左耳24只,右耳22只)慢性穿孔稳定且穿孔面积超过紧张部面积的50%,SD大鼠鼓膜慢性穿孔模型成功率76.7%(46/60)。造模过程中共有14耳被剔除,1只大鼠因麻醉意外死亡,7耳鼓膜感染,5耳穿孔完全或未完全愈合;2.模型组愈合率22.7%(5/22),血竭蜈蚣油组穿孔愈合率83.3%(20/24),两组鼓膜愈合率有显著性差异(P<0.05),愈合时间血竭蜈蚣油组明显缩短(P<0.05);3.血竭蜈蚣油治疗后愈合的鼓膜厚度及组织结构与正常鼓膜相近(P>0.05),而正常对照组和血竭蜈蚣油组愈合的鼓膜比模型组都要厚(P<0.05),模型组较薄的原因是由于鼓膜中间纤维组织层缺失。 结论:1.大鼠鼓膜与人类结构相似,且用于制作慢性鼓膜穿孔模型成功率高,是慢性鼓膜穿孔实验研究较为理想的动物模型;2.血竭蜈蚣油可以提高大鼠慢性鼓膜穿孔的愈合率,有明显促进鼓膜上皮细胞及成纤维细胞增生、加快鼓膜愈合的作用。