尖孢镰刀菌古巴专化型[Fusarium oxysporum Schlecht.f.sp.cubense（E.F.Smith）W.C.Snyder et H.N.Hansen]引致的香蕉枯萎病是世界性的香蕉毁灭性病害。近年来,毒性较强的4号小种蔓延日益严重,尚缺乏十分有效的防治措施,使香蕉产业面临更加严峻的挑战。通过研究香蕉枯萎病菌的致病相关基因不仅增加人们对其致病机理的了解,而且还可为发展新的防治策略提供理论依据。以本实验室在前期研究中筛选到一个香蕉枯萎病菌4号生理小种致病力减弱的插入突变体W2987为基础,该突变体的T-DNA插入位点位于两个基因的中间。因此为了弄清这两个基因的功能,本研究分别克隆了T-DNA插入可能影响的基因FOIG₀1729和FOIG₀1730;通过对该两个基因的敲除、突变体表型分析及致病力检测,分析了香蕉枯萎病菌FOIG₀1729和FOIG₀1730两个基因与致病力相关的功能,主要结果如下:1.NCBI数据库比对以及聚类分析表明,FOIG₀1729基因编码的蛋白与两个尖孢镰刀菌的假定蛋白有极高的同源性,与镰刀菌相应的同源蛋白聚在同一分支,但在其他种物种中均无法找到同源蛋白,说明FOIG₀1729是个新基因且在镰刀菌中相对保守;FOIG₀1730基因编码的蛋白与其他镰刀菌的假定蛋白紧密地聚在一支,虽然在脉孢菌和黄曲霉菌中也比对到同源蛋白,但相似率极低,在其他种物种中均无法找到同源蛋白,说明FOIG₀1730是个新基因且在镰刀菌中是保守的。2.应用PEG介导的原生质体转化法,分别对目标基因FOIG₀1729和FOIG₀1730进行了敲除,经PCR和Southren杂交检测验证所得的转化子是正确的FOIG₀1729和FOIG₀1730基因敲除突变体。q RT-PCR对获得的敲除突变体进行FOIG₀1729和FOIG₀1730目标基因的表达量分析表明,敲除突变体中均检测不到目标基因的表达。3.FOIG₀1729基因敲除突变体的菌落形态、生长速率等方面与野生型菌株XJZ2不存在显著差异,对过氧化氢不敏感,对细胞壁敏感性试剂刚果红和荧光增白剂不敏感,但突变体产孢量显著减少,且孢子耐热性较差。FOIG₀1730基因敲除突变体的菌落形态、生长速率也与野生型无明显差异,对过氧化氢不敏感,对细胞壁敏感性试剂刚果红和荧光增白剂不敏感,产孢量有小幅减少,孢子耐热性较差。4.两个基因的敲除突变体对大肠杆菌的毒力均有明显减弱,在同等条件下,野生型能抑制大肠杆菌的生长,并在平板上形成明显的抑菌圈,而突变体则完全不能产生抑菌圈,说明突变体的产毒能力显著下降。采用qRT-PCR检测发现在FOIG₀1729和FOIG₀1730基因敲除突变体中白僵菌素合成起始相关基因kivr的表达量,均显著下调,表明该两个基因都与白僵菌素的合成有着密切关系。5.与野生型菌株相比,FOIG₀1729基因敲除突变体对香蕉苗的致病力显著减弱,FOIG₀1730基因敲除突变体对香蕉苗的致病力也有小幅度减弱。以上结果表明:FOIG₀1729和FOIG₀1730基因与香蕉枯萎病菌的致病力密切相关,其在致病过程中作用机制极有可能是通过影响FOC孢子的产生或是孢子的活力,进而影响包括白僵菌素在内的真菌毒素的形成,进而降低了对寄主香蕉苗的致病力。