线粒体蛋白UQCRC2在结直肠癌中的表达及生物学功能的研究

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目的:线粒体蛋白UQCRC2是线粒体氧化磷酸化复合物III的重要组分。目前没有足够的证据证实UQCRC2与肿瘤发生发展之间的关系。本实验主要探索了结直肠癌中UQCRC2的表达水平与预后的关系,以及UQCRC2对结直肠癌的生物学功能的影响。方法:纳入2009年1月至2012年1月就诊于青岛市市立医院普外科的89例结直肠腺癌患者,采用免疫组化方法检测该89例配对肿瘤组织及癌旁组织中UQCRC2表达水平,采用SPSS24.0分析UQCRC2表达水平与患者临床病理特征的相关性,并分析其与患者生存预后的关系。实时定量PCR(qRT-PCR)方法检测结直肠癌细胞系HCT116、RKO、SW620、SW480中UQCRC2的表达水平。选取结直肠癌细胞HCT116、RKO分别通过慢病毒转染短发夹RNA干扰UQCRC2基因表达(shUQCRC2组),并设阴性对照(shCtrl组)。通过qRT-PCR及Western blot检测慢病毒稳定转染细胞系中UQCRC2 mRNA及蛋白的表达。进而通过Celigo细胞计数、MTT测定、细胞克隆形成实验、流式细胞术,检测UQCRC2表达对结直肠癌细胞生长、增殖、细胞周期和凋亡的影响。结果:在89例结直肠癌患者中,结直肠癌组织中UQCRC2的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.0001)。结直肠癌组织中UQCRC2的表达水平和肿瘤浸润深度(T)(P=0.015)、淋巴结转移(N)(P<0.001),TNM分期(P<0.001)呈正相关,但与性别、年龄、肿瘤部位及分化程度无关(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,UQCRC2表达水平与结直肠癌患者的总生存期(overall survival,OS)存在显著相关性(P<0.0004),UQCRC2高表达的患者预后较差。Cox多因素回归分析显示,UQCRC2表达(P=0.031)、远处转移(P=0.016)是影响结直肠癌患者总生存期(OS)的独立危险因素。qRT-PCR方法检测结直肠癌细胞系HCT116、RKO、SW620、SW480中UQCRC2 mRNA的表达水平,其中在HCT116、RKO中表达相对较低。成功构建能够干扰UQCRC2表达的慢病毒载体,并建立慢病毒稳定转染的结直肠癌细胞系RKO和HCT116。qRT-PCR和Western blot结果表明,与阴性对照组(shCtrl)相比,shUQCRC2组的UQCRC2表达明显下调(P<0.05)。通过Celigo细胞计数绘制细胞生长曲线显示,RKO中shUQCRC2组较shCtrl组细胞生长慢(P<0.05)。在RKO和HCT116中,shUQCRC2组OD490值及细胞克隆计数较shCtrl组明显降低(P<0.05)。与shCtrl组相比,RKO细胞中shUQCRC2组细胞周期G1期比例增加(P<0.05),S期比例下降(P<0.05),细胞凋亡率显著增加(P<0.05);HCT116细胞中shUQCRC2组细胞周期G2/M期比例增加(P<0.05),G1期和S期比例减少(P<0.05),细胞凋亡率显著增高(P<0.05)。结论:UQCRC2在结直肠癌肿瘤组织中表达升高且与恶性临床病理学特性有关,其可作为评估患者预后的潜在指标。UQCRC2基因的低表达可抑制结直肠癌细胞RKO和HCT116的细胞生长与增殖,导致细胞周期阻滞,促进细胞凋亡,因此UQCRC2可为临床治疗结直肠癌提供新的靶点。
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