基于质谱快速、灵敏及准确的特性，它已成为高选择、高通量筛选复杂天然药物中活性成分的理想分析工具。尤其是它与高效液相等色谱分离技术联用以及其多级串联质谱技术的发展，能够在线的快速提供大量有关化合物分子量以及分子结构信息，具有其它分析方法不可比拟的优越性。本论文成功地应用了电喷雾串联质谱高效液相色谱联用技术，开展了黑鳗藤和蔓剪草提取物中快速筛选免疫活性的C₂₁甾体苷以及区分同分异构体的研究，并应用能量分辨质谱以及金属诱导的质谱途径对C₂₁甾体苷的裂解规律进行了系统探讨。一)应用高效液相色谱／电喷雾串联质谱法对黑鳗藤藤茎中具有免疫活性的C₂₁甾体苷进行快速筛选：经高效液相色谱分离的C₂₁甾体苷流分在线进入质谱，在全扫描的一级质谱中主要生成[M+Na]⁺，观察不到任何碎片的产生，因而可以准确地确定C₂₁甾体苷分子量。接着对[M+Na]⁺进行多级串联质谱研究，[M+Na]⁺经碰撞诱导裂解，糖苷键断裂，产生表征糖序列的特征碎片离子，进而确定糖链的单糖序列；C₂₁甾体苷元母核上的侧链中性丢失，依据中性丢失的分子量，可以推断侧链的组成。为了进一步确证，我们还对各流分进行了离线的高分辨傅立叶变换离子回旋共振多级串联质谱研究，测定了分子离子以及各碎片离子的精确质量数，进而确证了各离子的元素组成。依据各C₂₁甾体苷的多级质谱裂解机理并对照标准品的液相保留时间，成功分离鉴定了10个具有免疫活性的C₂₁甾体苷，其中两个是新化合物。高效液相色谱／电喷雾串联质谱法与质谱的选择离子流图相结合，依据“质谱指纹”，成功分离鉴定了黑鳗藤根部包括四组同分异构体在内的22个具有免疫活性的三糖基C₂₁甾体苷成分。其中有10个是新化合物。二)基于多级串联质谱实验中能量分辨质谱可以用来区分同分异构体的特点，我们首先对已知C₂₁甾体苷进行系统的多级能量分辨质谱的研究，再结合高效液相色谱／电喷雾串联质谱技术，依据C₂₁甾体苷的质谱裂解规律，成功分离鉴定了蔓剪草中的8个C₂₁甾体苷，其中四个是新合物。三)由于金属离子常常能诱导化合物的质谱裂解模式发生改变，这为鉴定化合物结构提供了新的契机。我们对碱金属（Li⁺，Na⁺，K⁺，Cs⁺）、碱土金属(Ca²⁺)以及过渡金属离子(Fe²⁺，Co²⁺，Ni²⁺，Cu²⁺，Zn²⁺)诱导的C₂₁甾体苷的质谱裂解机理进行了详细系统的研究。并依据C₂₁甾体糖苷-过渡金属离子复合物的质谱裂解机理成功区分了一对由非还原末端单糖异构引起的同分异构C₂₁甾体苷。此外，论文详细综述了质谱及其联用技术的工作原理以及其在天然药物活性成分分析中的应用。