I群4型禽腺病毒（Fowl Adenovirus-4,FAdV-4）是感染禽类的一种高度接触性传染病病原,在临床上感染鸡主要引起肝炎-心包积水综合征。近年来,该病在我国各地区流行广泛,主要侵害3～7周龄鸡,发病快,死亡率可达80%,给养禽业带来较大的经济损失。国内针对FAdV-4防控的商品化疫苗不能完全满足防控需求,卵黄抗体是禽类通过特定的抗原免疫后聚集于卵黄中的特异性抗体,以特异性强、成本低、安全等优势,应用于家禽疾病的预防与治疗。本研究为了提高免疫原的选取FAdV-4 DQ15株接种LMH悬浮细胞培养,72 h后收取细胞培养的病毒液,离心后收取病毒上清液。对离心后的病毒液进行了毒力测定和特异性检验。经100倍稀释的病毒液感染42日龄SPF鸡,能引起70%的鸡发病死亡,病毒液能够被禽腺病毒特异性阳性血清中和。对悬浮细胞培养工艺进行了优化,确定了细胞传代的最佳密度为1.4×10~6～1.6×10~6 cells/mL,接毒时最佳细胞密度为8.0×10~6 cells/mL,病毒最佳接种剂量为0.1%,测得病毒滴度为109.23TCID50/0.1mL。将抗原液加入至终浓度为0.1%甲醛溶液37℃灭活16 h,加白油佐剂乳化制备免疫原,并对免疫原的安全性、剂型、物理性状、无菌检验和免疫效力进行检测。免疫原剂型为油包水型,物理性状稳定,安全性良好,未检测到细菌等外源微生物。将制备的免疫原免疫21日龄SPF鸡,进行免疫效力检验,结果显示SPF鸡接种免疫原后21 d感染FAdV-4病毒液,0.2 mL/只,观察10 d后可见鸡只全部健活,剖检无病理变化,临床保护率为100%。以免疫原连续3次免疫产蛋鸡,免疫间隔21 d。于首次免疫后每隔1周采集免疫鸡血清并收集鸡蛋提取抗体进行中和效价检测。结果显示,免疫后特异性卵黄抗体水平不断升高,至免疫后第10周达到最大值后逐渐下降。对卵黄抗体提取的方法进行了优化,确定了酸化水的最佳稀释度为1:8,pH值为5.2,辛酸最佳浓度为1%。按照已优化的工艺制备卵黄抗体,收取高免蛋经蛋壳消毒、蛋黄分离、醋酸去脂、辛酸萃取、粗滤、过滤除菌、甲醛灭活等步骤后制备成抗I群4型禽腺病毒卵黄抗体。对卵黄抗体的物理性状、辛酸残留量、安全性进行检测,均符合卵黄抗体标准。为检验FAdV-4卵黄抗体对鸡的保护率,对21日龄SPF鸡注射不同中和效价的卵黄抗体后的第7 d感染FAdV-4病毒液,检测不同中和效价的卵黄抗体对感染FAdV-4鸡的预防保护情况。结果显示SPF鸡注射中和效价为1:64的卵黄抗体,攻毒后6 d内全部死亡;注射中和效价为1:128的卵黄抗体,攻毒后10 d有2只存活,其中1只泄殖腔拭子仍有排毒;SPF鸡注射中和效价为1:256的卵黄抗体,可以抵抗FAdV-4攻毒,观察10 d,无不良反应,剖检无病理变化,仅在感染后第三天有1只鸡肛拭子可以检测到排毒,临床保护率为100%。紧急治疗实验中,对21日龄的SPF鸡经胸部肌肉感染FAdV-4病毒液,分别于病毒感染后24 h和36 h,采用中和效价为1:256的卵黄抗体进行紧急治疗,结果显示:注射卵黄抗体后10 d内,紧急治疗鸡均健活,剖检无病理变化,攻毒对照组鸡全部死亡。SPF鸡36 h紧急治疗组除3d～5d各有2只和4只鸡泄殖腔拭子检测到排毒外,大多数鸡在10 d内泄殖腔拭子检测均为阴性,对FAdV-4感染鸡群治愈率达100%。综上所述,本实验所制备的FAdV-4免疫原和卵黄抗体均能有效抵御SPF鸡对血清4型禽腺病毒的感染。FAdV-4卵黄抗体制作流程简单、成本较低、安全性好、保护期长且效果明显、可以有效用于预防和紧急治疗禽腺病毒4型感染,有很好的应用价值。