论文部分内容阅读
目的:探讨绞股蓝多糖(Gynostemma pentaphyllum polysaccharides,GP)对1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methy14-phenylpyridinium,MPP+)诱导的褐家鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞损伤的保护作用及其机制,从而为帕金森病预防和治疗提供实验依据。方法:以MPP+损伤PC12细胞为帕金森病细胞模型,将培养的PC12细胞分为3组:空白对照组、MPP+组、GP+MPP+组。对照组给予无血清的RPMI-1640培养基培养;MPP+组给予1mMMPP+处理24h;GP+MPP+组给予50μg/mlGP处理2h,随后给予1m MMPP+处理24h。倒置显微镜下观察细胞形态改变并进行细胞计数和绘制细胞生长曲线,用流式细胞仪分析细胞周期变化,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组PC12细胞存活率,比色法检测PC12细胞释放的乳酸脱氢酶(Lactatedehydrogenase,LDH)活性,流式细胞术检测细胞凋亡,细胞色素C试剂盒检测细胞色素C水平,荧光定量法检测caspase-3和caspase-9活性,Westernblotting检测Cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2和PARP蛋白表达水平。结果:①1mMMPP+可导致PC12细胞数目变少,形态变圆,50μg/mlGP可以使PC12细胞数目增多;②1mMMPP+可导致PC12细胞密度下降,增长缓慢,50μg/mlGP可以使PC12细胞密度上升,增长速度加快;③1mMMPP+可导致PC12细胞细胞增殖指数(PI)降低;50μg/mlGP可以使PC12细胞细胞增殖指数(PI)升高;④1mMMPP+可导致PC12细胞存活率下降;50μg/ml GP可以使PC12细胞存活率增加;⑤MPP+导致PC12细胞显著释放LDH,50μg/ml GP降低PC12细胞释放LDH;⑥1mMMPP+导致细胞凋亡率明显增高,50μg/mlGP使细胞凋亡率显著下降;⑦1mMMPP+孵育细胞24h显著增加caspase-3(P<0.01)和caspase-9活性(P<0.01)及Cleaved caspase-3的表达(P<0.01),GP+MPP+组细胞中caspase-3(P<0.01)和caspase-9(P<0.01)活性较MPP+组显著为低;Cleaved caspase-3的表达(P<0.01)较MPP+组显著为低;⑧与空白对照组比较,1m MMPP+孵育细胞24h降低了Bcl-2/Bax比率(P<0.01),而GP+MPP+组Bcl-2/Bax比率较MPP+组高(P<0.01)。⑨与空白对照组比较,MPP+组PC12细胞中PARP蛋白裂解比例增加,而GP+MPP+组PARP蛋白水平裂解比例降低。结论:GP对MPP+致PC12细胞损伤具有保护作用,其机制是通过调控Bcl-2和Bax蛋白表达和线粒体途径抗MPP+诱导的PC12细胞凋亡。