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目的：诸多研究者在对乳腺癌的研究中显示，在雌激素受体（ER）阴性的部分乳腺癌组织中（包括三阴性乳腺癌），G蛋白偶联雌激素受体-1（G protein-coupled estrogen recepter,GPER1/GPR30）的阳性表达率较高。这说明对于ER阴性的乳腺癌细胞，雌激素也可能通过激活GPR30来促进肿瘤进展，也就是说GPR30很可能成为ER受体阴性乳腺癌新的治疗靶点。而GPR30作为新的7次跨膜受体，在乳腺癌发生发展过程中发挥重要作用，其中一个重要作用就是可反式激活表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）等信号通路发挥快速的非基因型雌激素效应，与ERα/β的作用方式显著不同。既往研究发现，雌激素可通过GPR30间接激活EGFR信号通路，进而激活其下游EGFR-MAPK信号通路，发挥促进肿瘤细胞增殖的作用。同时有研究还表明，若乳腺癌患者EGFR高表达则预示着预后不良，对判断乳腺癌患者预后及指导临床治疗有重要意义。结合陆续有学者发现，GPR30过表达与乳腺癌转移有显著相关性，我们想到GPR30与EGFR下游其他信号通路之间是否也存在交叉关系，进而对乳腺癌转移产生影响。 信号转导及转录活化因子STAT3信号通路是EGFR下游一条重要信号通路，同时是EGFR、IL-6/JAK、Src等多个致癌性信号通道的汇聚焦点，在多种恶性肿瘤中都有过表达，更在乳腺癌中有持续性过度激活。那么，在高表达GPR30的三阴性乳腺癌中，GPR30与STAT3信号通路之间是否存在交叉影响，并协同促进乳腺癌转移的机制目前还尚不明了。遂本研究通过部分体外实验方法探究GPR30与STAT3之间的相互关系，并进一步研究它们在肿瘤转移方面的作用。 方法： 1.细胞培养在含5%CO2、37℃的恒温培养箱中，用含15%胎牛血清的高糖DMEM培养基培养4种乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-468、MDA-MA-231及MDA-MB-453，隔天换液，4天左右传代冻存。 2.应用Western-blot的实验方法检测4种不同类型乳腺癌细胞系中GPR30的蛋白表达含量。 3.应用免疫荧光实验方法检测高表达GPR30的三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468中GPR30表达位置。 4.应用Western-blot的实验方法检测高表达GPR30的三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-468经不同浓度及时间的雌激素（E2)和GPR30特异性激动剂G1刺激后p-stat3/t-stat3的蛋白表达水平，观察GPR30的活化是否间接激活EGFR下游STAT3信号通路。 5.应用Western-blot的实验方法检测使用GPR30特异性阻断剂G15作用于MDA-MB-468细胞阻断GPR30活化再经E2和G1刺激，此种实验条件下其p-stat3/t-stat3的蛋白表达水平，以进一步观察GPR30活化与EGFR下游STAT3信号之间的相关性。 6.应用划痕实验观察，当激活和阻断GPR30后，MDA-MB-468乳腺癌细胞的迁移能力变化；以及使用选择性阻断剂阻断信号分子STAT3后，肿瘤细胞迁移能力变化。 7.统计学方法：数据处理采用SPSS21.0，计量资料采用±s或M±QR表示,组间比较采用单因素方差分析或K-W H秩和检验，组间两两比较采用LSD法进行，以P<0.05为差异有统计学意义。x 结果： 1.Western-blot方法检测4种乳腺癌细胞 MCF-7、MDA-MB-468、MDA-MA-231及MDA-MB-453中GPR30的蛋白表达量分别为1.07±0.05、0.84±0.09、0.15±0.04、0.45±0.12；得出MCF-7及MDA-MB-468细胞中GPR30高表达（P<0.05），因MDA-MB-468乳腺癌细胞为三阴性乳腺癌细胞，遂选为实验用细胞。 2.免疫荧光染色实验结果由 Fig2可见， GPR30高表达的 MDA-MB-468细胞主要定位于胞膜及胞质中。 3.Western-blot方法测不同浓度E2（0ng5ng10ng20ng）刺激MDA-MB-468细胞后p-stat3蛋白表达水平分别为：0.98±0.009、1.13±0.041、1.31±0.015、1.58±0.04；t-stat3蛋白表达水平分别为：1.10±0.09、1.14±0.06、1.15±0.12、1.12±0.1；E2不同刺激时间 p-stat3蛋白表达水平分别为：0.98±0.018、1.17±0.103、1.54±0.035、0.73±0.068；t-stat3蛋白表达水平分别为：1.07±0.19、1.03±0.15、1.11±0.04、1.09±0.03；不同浓度G1（0nM1nM10nM100nM）刺激MDA-MB-468细胞后p-stat3蛋白表达水平分别为：0.98±0.017、1.08±0.072、1.29±0.072、1.56±0.059；t-stat3蛋白表达水平分别为：1.18±0.09、1.08±0.04、1.17±0.05、1.15±0.07；G1不同刺激时间p-stat3蛋白表达水平分别为：0.97±0.022、1.15±0.161、1.59±0.031、0.77±0.061；t-stat3蛋白表达水平分别为：1.07±0.19、1.10±0.02、1.17±0.06、1.10±0.08。随着刺激药物浓度及时间的增加，p-stat3蛋白表达也逐渐增加，并具有浓度及时间依赖性（P<0.05）；而t-stat3蛋白在各组间的表达较恒定，不随刺激药物浓度及时间的增大及延长而发生改变。 4.Western-blot法测各组（Control、E2刺激组、G1刺激组、E2+G15处理组、G1+G15处理组）p-stat3蛋白表达水平分别为：0.97±0.029、1.22±0.033、1.23±0.065、0.67±0.073、0.66±0.084；t-stat3蛋白表达水平分别为:1.15±0.06、1.17±0.05、1.15±0.09、1.10±0.10、1.10±0.08。当使用特异性阻断剂阻断GPR30活化后，EGFR信号通路下游信号分子p-stat3蛋白表达水平显著降低（P<0.05）； 5.划痕实验测各组（control E2刺激组G1刺激组E2+G15处理组G1+G15处理组 E2+G15+S3I-201处理组 G1+G15+S3I-201处理组）肿瘤细胞24h迁移距离分别为：（106±15.28）μm、(200±26.46)μm、(186±32.15)μm、(90±26.45)μm、(86±15.27)μm、(47±14.98)μm、(56±16.52)μm；48h迁移距离分别为：（234±28.92）μm、(375±18.17)μm、(383±18.52)μm、(149±11.02)μm、(163±20.66)μm、(111±14.15)μm、(103±7.37)μm；结果显示，当使用刺激因子作用细胞一定时间活化GPR30后，细胞迁移能力显著增强（P<0.05），而使用特异性阻断剂阻断GPR30/STAT3信号通路后，细胞迁移能力则明显减弱（P<0.05）； 结论： 1.随着E2及G1刺激浓度及时间梯度的增加，p-stat3蛋白表达水平也逐渐增高，而阻断GPR30的活化效应后，p-stat3蛋白表达水平显著降低。由此说明GPR30的活化可反式激活STAT3信号通路。 2.激活GPR30/STAT3信号通路后肿瘤迁移能力明显增加，但不论是从哪个方向阻断这一信号通路（阻断GPR30或阻断STAT3）,肿瘤细胞迁移能力均明显减弱，进一步证明GPR30/STAT3信号通路在三阴性乳腺癌转移方面发挥重要作用。 3.以上实验结果初步证明，GPR30/STAT3信号通路可能是雌激素促进乳腺癌细胞增殖、转移的另外一个重要途径。