背景与目的:黑色素瘤是由黑色素细胞不正常的增生和分化引起的,在内脏、黏膜、皮肤都可能发生,恶性程度高,易通过血液转移,且死亡率高,其发病原因多与紫外线照射、外伤刺激、免疫反应有关。目前常规放化疗对晚期黑色素瘤疗效欠佳且很难用根治性手术切除。随着臭氧层的破坏发病率也在逐年上升,所以急需找到一种有效的治疗方案。放疗作为一种治疗恶性肿瘤的物理手段,已被广泛应用于多种恶性肿瘤的治疗。电离辐射可以直接损伤肿瘤细胞的DNA,从而杀死肿瘤细胞。但大剂量的放疗通常会给正常组织带来损害,有些病人因不能耐受放疗的毒副作用,而不能得到有效的治疗,并且有报道称放射治疗能影响肿瘤微环境,上调肿瘤细胞中程序性死亡配体1（PD-L1）的表达。芹黄素是一种天然的黄酮类化合物,也是中药提取物,广泛的存在于蔬菜和水果中。芹黄素具有抗氧化、调节免疫、调节血压、抗炎、促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤生长、阻滞肿瘤细胞周期作用。最近在黑色素瘤细胞里发现芹黄素能抑制由INF-γ诱导的PD-L1的表达。随着近些年人们对肿瘤微环境研究的不断深入,发现PD-L1的表达在肿瘤细胞内被普遍上调。当PD-L1与T细胞上表达的程序性死亡受体1（PD-1）结合,就会抑制T细胞的活性,从而减弱了T细胞杀伤肿瘤细胞的能力。随着医疗技术的发展,关于免疫检查点阻断的药物也相继通过审批,并且运用免疫检查点阻断剂联合放射治疗在临床治疗恶性肿瘤方面取得了显著的效果。因此在本研究中,我们通过体外实验和动物模型实验研究在芹黄素参与的情况下放射治疗对黑色素瘤细胞的影响及其原理。方法与结果:首先,我们分别用对照、芹黄素、放射治疗及芹黄素联合放射治疗对黑色素瘤细胞进行处理。通过平板克隆实验,我们发现芹黄素可以增强放射治疗对黑色素瘤的抑制作用,同时使用芹黄素与放射治疗能更好的抑制恶性黑色素瘤细胞的生长。通过免疫荧光检测,我们发现芹黄素与放射治疗共同使用时能进一步下调了细胞核中Ki-67的含量。此外,细胞凋亡实验提示芹黄素联合放射治疗能促进恶性黑色素瘤细胞的凋亡。通过对细胞周期的分析,我们发现芹黄素与放射治疗能协同阻滞细胞周期,使更多的黑色素瘤细胞阻滞在G2/M期。随后,我们用芹黄素处理Jurkat T细胞,通过蛋白免疫印迹实验对细胞中蛋白质进行分析,发现芹黄素能够有效地下调Jurkat T细胞中PD-1的表达,而且这种作用能被蛋白酶体抑制剂（硼替佐米,PS341）抑制。此外,我们通过细胞共培养实验发现经过芹黄素处理的活化的Jurkat T细胞对黑色素瘤细胞杀伤力更强。最后,我们通过动物模型实验验证芹黄素和放射治疗在动物体内的作用。我们发现同时使用芹黄素和放射治疗的小鼠肿瘤生长速度最慢,并且在联合治疗组肿瘤组织中浸润的免疫细胞最多。此外,通过蛋白免质免疫印迹对小鼠肿瘤内蛋白质进行分析,我们发现芹黄素能够逆转放射治疗引起的肿瘤组织内PD-L1的上调。结论:1.芹黄素协同放射治疗,更有效地抑制恶性黑色素瘤细胞的增殖,并且进一步促进黑色素瘤细胞的凋亡。2.同时使用芹黄素和放射治疗使更多的黑色素瘤细胞阻滞在G2/M期。3.芹黄素通过蛋白酶体途径加快PD-1的降解,下调了PD-1在Jurkat T细胞中的表达。4.芹黄素能够增强Jurkat T细胞杀伤肿瘤细胞的能力。5.芹黄素协同放射治疗,有效地抑制肿瘤在小鼠体内的生长,增加肿瘤中T细胞的浸润,并逆转放疗引起的PD-L1的上调。