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背景与目的 霉菌毒素在肿瘤病因学上的作用已经被大多数学者认同。研究发现多数的霉菌毒素主要在基因水平导致基因突变而致癌。其中交链孢霉酚(Alternariol，AOH)和交链孢酚单甲醚(Alternari-oimonomtyhi ether，AME)已证明具有强的致癌性。而DNA聚合酶β(polymerase polβ)是DNA聚合酶家族中的一员，在DNA损伤修复中起着重要的作用，它主要对1-4个碱基突变进行碱基切除修复(base excision repair，BER)。已经证实在多种肿瘤中DNA polβ的表达是增高的，且有多种形式的碱基突变。然而霉菌毒素的致癌机制与polβ是否有一定的关系，国内外还没有相关报道。本试验将野生型polβ及空载体分别转染入NIH3T3细胞，分别获得稳定表达野生型polβ及空载体的NIH3T3细胞株；用不同浓度的AOH诱导这些细胞，观察AOH对polβ的致突变作用及其对细胞蛋白表达的影响。为霉菌毒素致病机制的分子水平研究也为polβ在基因治疗方面的研究提供重要依据。 实验方法 1．细胞培养转染及AOH诱导 1．1 从DH5α细菌中提取质粒pEGFP-C3、pEGFP-C3-polβ。 1．2 将质粒用脂质体包裹转染入NIH3T3细胞；G418筛选2周；得到稳定高表达转染野生型polβ和转染空质粒的NIH3T3细胞株。 1．3 药物诱导转染pEGFP-C3-polβ的NIH3T3细胞、pEGFP-C3的NIH3T3细胞及未转染的NIH3T3细胞48小时。 2．提取mRNA逆转录出cDNA，扩增出polβ全基因，插入T载体，进行DNA序列