Bacillus subtilis QM3对小麦种子萌发淀粉酶的影响及关键基因表达量研究

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种子萌发是植物生长发育的起始阶段,是植物生长发育的基础。小麦作为非常重要的粮食作物,其种子萌发状况不好会影响小麦的生长发育甚至产量,因此为了提高小麦的产量对其的萌发过程进行研究显得尤为重要。微生物因其对环境无污染,受到了很多研究者的关注,并且已经有一些微生物肥料应用于农业种植中,用于提高其产量。枯草芽孢杆菌是一种分布广泛,在芽孢杆菌属里面是非常受关注的生防菌。本研究以小麦为实验材料,研究不同浓度的B.subtilis QM3菌液浸种对小麦萌发形态指标、淀粉酶活性、淀粉酶同工酶和降解淀粉关键基因表达量的影响,旨在为枯草芽孢杆菌促进植物萌发方面提供一定的科学依据。主要研究结论如下:(1)用不同浓度的B.subtilis QM3菌液浸种小麦种子3 h,在培养皿中培养使其萌发7天,用计数、称量和根系扫描系统的方法分别对小麦种子萌发过程中发芽率,发芽势,发芽指数,芽长,种子活力,小麦的根部形体指标,鲜重,干重和根冠比描述分析。结果表明,不同浓度的菌液对各个萌发指标的促进作用不完全相同,其中10~7 CFU/mL B.subtilis QM3菌液浸种小麦种子对这些指标的促进作用最显著(p<0.05),相比于对照组,发芽势和发芽指数分别增加了9.20%和8.59%;在小麦种子萌发第3天,地下部分鲜重、地上部分鲜重和根冠比分别增加了24.55%,12.38和10.88%;在小麦种子萌发第4天,芽长和种子活力指数分别增加了22.43%和27.60%;在小麦种子萌发第5天,根部形态指标包括根的长度、表面积、投影面积和体积分别增加了61.47%,65.39%,63.07%和59.15%,鲜重和干重分别增加了21.79%和14.03%。一定浓度的B.subtilis QM3菌液浸种小麦种子可以有效的促进小麦萌发。(2)用不同浓度的B.subtilis QM3菌液浸种小麦种子3 h,用培养皿培养使其萌发7天,每天取不同处理的小麦种子,用3,5‐二硝基水杨酸法测定小麦种子中α-淀粉酶、β-淀粉酶、总淀粉酶的活性;用普鲁兰法测定极限糊精酶的活性。结果表明,小麦种子在萌发过程中各种酶活性均发生了变化。α‐淀粉酶、β‐淀粉酶、总淀粉酶和极限糊精酶的活性变化趋势均为先增加后减少,达到最大活性的时间不完全相同,基本上在萌发4-5天时他们的活性达到最大。经过各个浓度的B.subtilis QM3菌液浸种处理以后,与对照相比对各种酶的活性影响程度不完全相同。10~6 CFU/mL的B.subtilis QM3浸种小麦种子可以显著提高各种酶的活性(p<0.05),处理效果最好。在小麦种子萌发第4天的时候,10~6 CFU/mL的B.subtilis QM3浸种小麦种子处理与对照组相比,α‐淀粉酶、β‐淀粉酶、总淀粉酶和极限糊精酶的活性分别增加了40.74%、30.85%、33.53%和28.14%。一定浓度的B.subtilis QM3浸种小麦种子可以提高淀粉酶的活性,促进小麦种子的萌发。(3)用10~6 CFU/mL的B.subtilis QM3菌液浸种小麦种子3 h,用培养皿培养使其萌发7天,每天取萌发的小麦种子样品,用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定小麦种子萌发过程中种子中α‐淀粉酶同工酶、β‐淀粉酶同工酶、总淀粉酶同工酶。结果表明,随着萌发时间的延长,小麦种子α‐淀粉酶同工酶、β‐淀粉酶同工酶、总淀粉酶同工酶的条带增多,亮度变亮且条带变宽,同工酶表达活性增强。经过10~6 CFU/mL的B.subtilis QM3处理种子后,淀粉酶同工酶与对照相比,淀粉酶同工酶的活性增强,表现为亮度增加,条带变宽。并且在小麦种子萌发第三天使,条带亮度增加的幅度最大,在萌发第五天条带亮度达到萌发时期的最大值。说明一定浓度的B.subtilis QM3浸种小麦种子可以提高种子中淀粉酶同工酶的活性,从而促进小麦种子萌发。(4)用10~6 CFU/mL的B.subtilis QM3菌液浸种小麦种子3 h,用培养皿培养使其萌发,取萌发3天的小麦种子,用实时荧光定量PCR的方法测定小麦种子中TaAmy1、TaAmy3和β-Amy基因的表达量。结果表明,菌液浸种小麦种子后与对照相比TaAmy1基因的表达量显著上升,增加2倍多,TaAmy3基因的表达量没有显著的变化,β-Amy基因表达量较少。推测B.subtilis QM3可能通过提高TaAmy1基因的表达量,促进种子萌发。
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