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红茶是世界上消费量最大的茶类,红茶中的多酚-茶黄素,具有广谱的抗癌功效(TuY.Y.et al.,2004;YangC.S.et.al,2000)。卵巢癌是妇科三大肿瘤之一,发病隐匿,致死率一直居高不下。卵巢癌干细胞是卵巢癌复发的根源,引起化疗抵抗和更强的侵袭性。饮用红茶能有效降低患卵巢癌的风险。本文建立了 UPLC高效同步分析红茶中的GA、咖啡因、8种儿茶素和四种主要茶黄素的方法;研究了 TF2a和TF2b对卵巢癌细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响及途径;TF3和CDDP协同抑制卵巢癌细胞及TF3抑制卵巢癌干细胞的效果和机制。主要成果如下:1、建立的UPLC方法分析红茶中GA、8种儿茶素、咖啡因和4种茶黄素,共14种成分仅需26 min,且分离度均大于1.5。线性系数R在0.9992～0.9999区间。14种成分的回收率达为95.81%～104.48%,稳定性好(RSDs＜4.49%)。UPLC方法精确度高,准确度好,14种成分的日内/日间RSDs<15%,REs在-15%～15%区间。所以,该方法是分析红茶及其产品中GA、8种儿茶素、咖啡因和4种茶黄素的高效准确的定量方法。2、TF2a和TF2b能有效抑制顺铂抵抗型卵巢癌细胞A2780/CP70,诱导A2780/CP70细胞凋亡和发生G1期阻滞。采用流式细胞术和Western Blot法分析证实,TF2a和TF2b能诱导A2780/CP70发生G1期阻滞。TF2a和TF2b通过共同下调CDK2,和分别下调CDK4蛋白和cyclinE1蛋白表达来诱导A2780/CP70细胞发生G1期阻滞。TF2a和TF2b激活p53通路诱导A2780/CP70细胞凋亡和周期阻滞通过p53 siRNA转染实验得到证实,并且还与引发DNA损伤,激活ATM/Chk/p53通路、抑制Akt磷酸化和调节MAPK通路有关。TF2a调节p38、Erk和JNK通路,TF2b激活Erk通路。3、Hoechst33342 DNA染色、细胞克隆形成方法、流式细胞术和WesternBlot法分析证实,TF3可以增强顺铂抵抗型卵巢癌细胞A2780/CP70和OVCAR3对CDDP的敏感性。TF3与CDDP协同抑制卵巢癌细胞,诱导细胞凋亡和发生G1/S期阻滞,且调节凋亡相关蛋白(caspase 3/7、cytochrome c、Bad、Bax和Bc1-2)和G1/S 期相关调控蛋白(cyclinA2,D1,E1,CDK2 和 CDK4)表达。TF3 和 CDDP能通过协同调节Akt的磷酸化水平来抑制卵巢癌细胞A2780/CP70和OVCAR3。TF3是一种潜在的天然化合物,用于降低CDDP的不良副作用,克服卵巢癌细胞对CDDP的耐药性。4、MTS法、克隆形成方法、细胞成球实验、流式细胞术和Western Blot法分析证实,,TF3能抑制卵巢癌A2780/CP70和OVCAR3干细胞,但是对A2780/CP70癌干细胞的抑制能力强于OVCAR3癌干细胞。pcDNA3-S33Yβ-Catenin质粒转染实验证实,TTF3是通过抑制Wnt/β-Catenin信号通路来抑制A2780/CP70 和 OVCAR3 癌干细胞的,下调干细胞中 β-Catenin、LEF-1、c-Myc和cyclin D1蛋白表达而起作用的。另外,β-Catenin过表达能减弱TF3对A2780/CP70和OVCAR3癌干细胞活力和肿瘤球形成能力的抑制效果。总之,本文建立了快速分析鉴定茶黄素的方法,并从抑制增殖、促进凋亡和诱导周期阻滞的角度对茶黄素的抗卵巢癌作用进行了评估;首次发现茶黄素能与顺铂协同抑制卵巢癌细胞及抑制卵巢癌干细胞。本研究拓展了人们对茶黄素抗癌机理的认识,为茶黄素可作为一种有潜力的抗癌化合物提供了更多的实验依据。