含纳米羟基磷灰石和PTH(1-34)复合水凝胶在位点保存中的成骨分化研究

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目的:在口腔种植学中,理想的骨移植材料的开发和研究仍然是一项挑战。该研究制备了含羟基磷灰石和甲状旁腺激素(PTH(1-34))的壳聚糖/海藻酸钠复合水凝胶支架材料,并探索该新型生物支架材料在位点保存技术中的体内外成骨分化作用。该实验可以为水凝胶未来的发展改良及临床应用提供重要的理论依据。实验方法:1.制备壳聚糖/海藻酸钠复合水凝胶(Gel)、含有纳米羟基磷灰石壳聚糖/海藻酸钠复合水凝胶(nHAp/Gel)和含有羟基磷灰石和PTH(1-34)的壳聚糖/海藻酸钠复合水凝胶(PTH/Gel),扫描电子显微镜观察水凝胶的微观结构,流变仪测试各组凝胶的机械性能。2.体外检测人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)在水凝胶中培养时细胞活力、粘附增殖以及成骨分化能力,无水凝胶(blank)组为对照组。3.实验选择18只SD雄性大鼠,随机分成nHAp/Gel组、PTH/Gel组和自然愈合组三组,前两组为实验组,自然愈合组设计为对照组,每组分别为6只。拔牙术后8周处死各组大鼠,取下颌骨,通过Micro-CT观察、HE染色和masson染色结果比较各组的新骨生成情况。结果:1.扫描电镜结果显示三组水凝胶均形成三维网状结构,其孔径大部分在100—300μm,nHAp/Gel和PTH/Gel两组水凝胶的孔隙2.水凝胶机械性能结果显示nHAp/Gel和PTH/Gel两组水凝胶的机械性能明显优于Gel组。3.hBMSCs的活力和增殖检测显示,与Gel组和blank组相比,nHAp/Gel和PTH/Gel两组会使细胞活性和增殖率升高。4.ALP活性和染色检测结果表明,nHAp/Gel和PTH/Gel水凝胶组在第7天和14天时ALP活性高于Gel和blank组。5.茜素红染色结果表明,nHAp/Gel和PTH/Gel水凝胶组hBMSCs矿化能力较Gel和blank组显著增强。6.拔牙后8周的Micro-CT和组织学染色结果均显示,n HAp/Gel和PTH/Gel水凝胶组相较于blank组的骨胶原和骨小梁密度增加,毛细血管丰富,实现了更多的牙槽骨组织再生。结论:1.nHAp/Gel和PTH/Gel两组水凝胶机械性能优异,有望作为骨移植材料应用于位点保存。2.Gel、nHAp/Gel和PTH/Gel三组水凝胶良好的生物相容性,nHAp/Gel和PTH/Gel可有效提高hBMSCs向成骨细胞分化的能力。3.nHAp/Gel和PTH/Gel两组水凝胶可有效促进牙槽骨再生,为骨修复支架材料提供新的研究方向和理论基础。
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