目的:初步探讨釉基质衍生物(Enamel Matrix Derivatives,EMD)对不同钛表面的骨髓间充质干细胞(Bone Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)膜片成骨分化的影响。方法:体外培养SD大鼠骨髓间充质干细胞并进行鉴定,倒置显微镜下观察其形态;成骨、成脂诱导分化后茜素红染色及油红O染色观察;流式细胞术分析BMSCs表面抗原标志。细胞计数试剂盒(CCK-8法)检测不同浓度的EMD对BMSCs增殖的影响,选取适宜浓度的EMD用于后续实验。BMSCs分别接种于光滑钛表面(smooth titanium surface)(对照组)、喷砂酸蚀钛表面(sandblasting and etching,SLA)(实验组)和阳极氧化钛表面(anodic oxidation surface,AO)(实验组),体外构建BMSCs细胞膜片,扫描电镜观察各组钛表面细胞膜片形态。BMSCs细胞膜片在25ug/ml EMD成骨培养基中分别培养7天、14天、21天,并检测其碱性磷酸酶活性(Alkaline Phosphatase,ALP)的吸光度值;分别利用实时荧光定量PCR和蛋白质印记法检测成骨形成相关基因的表达,如Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor-2,RUNX2)、锌指转录因子Osterix(OSX)、骨钙素(Osteocalcin,OCN)。结果:将提取的细胞通过倒置显微镜下形态学观察、成骨成脂诱导分化后的茜素红和油红O染色观察以及流式表面抗原鉴定分析证实为骨髓间充质干细胞。CCK-8法检测结果提示,5-50ug/ml EMD对BMSCs有明显促进增殖的作用,其中25ug/ml EMD对BMSCs的增值作用最明显,而100ug/ml EMD对BMSCs呈现抑制作用。扫描电镜观察BMSCs细胞膜片在光滑钛表面细胞之间的连接比较单一,连接处有断裂,细胞层数比较少。喷砂酸蚀钛表面细胞层数和细胞基质较多,细胞层之间比较杂乱且界限不清楚。阳极氧化钛表面可见多层细胞均匀分布,基质互相连接成片,且较平整,界限较清晰。ALP活性实验提示:实验组ALP活性均高于对照组(P<0.05),7天和14天时ALP活性阳极氧化组高于喷砂酸蚀组(P<0.05),21天时未见统计学差异;实时荧光定量PCR技术检测结果显示:与对照组相比,实验组RUNX-2、OSX、OCN表达均上调(P<0.05),以阳极氧化组最为明显。蛋白印记法检测结果显示:与对照组相比,RUNX-2、OSX和OCN蛋白表达水平在各时间段均高于对照组,组内比较阳极氧化组表达更高(P<0.05)。结论:EMD能促进喷砂酸蚀和阳极氧化钛表面BMSCs细胞膜片的成骨分化,且阳极氧化表面BMSCs细胞膜片的成骨能力更强。