羊源金黄色葡萄球菌的耐药和分型检测及金黄色葡萄球菌ndhF缺失株耐药相关功能研究

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细菌性疾病是制约畜牧产业发展的主要原因之一,其中金黄色葡萄球菌(金葡菌)是畜禽临床常见的病原菌之一。目前,治疗金葡菌感染常用抗生素疗法,然而长期使用抗生素会导致金葡菌耐药性的产生。因此,了解金葡菌的耐药表型和基因型,探索金葡菌耐药基因的相关功能对指导金葡菌感染的合理用药具有重要意义。故本研究首先调查了海南省儋州和定安黑山羊养殖场中金葡菌的耐药和毒力情况,并对获得金葡菌进行分型分析;随后研究了金葡菌多肽类抗生素耐药基因ndhF缺失对金葡菌的影响,以期为治疗金葡菌感染及后续耐药机制研究提供理论依据。本课题主要取得以下结果:1.儋州和定安两个羊场金葡菌耐药、毒力和分型的研究。本试验从健康的海南黑山羊中共获取了48份鼻拭子和40份奶样,从中共鉴定出52株金葡菌;药敏结果显示,产生耐药的抗生素有克林霉素(42.3%)、四环素(26.9%)、利福平(25.0%)、庆大霉素(21.2%)、阿莫西林(19.2%)、红霉素(5%)、环丙沙星(1.9%)和头孢西丁(1.9%),头孢噻肟无耐药现象;进一步研究发现,金葡菌耐药基因检出率为:nor A(71.2%)、tetk(57.7%)、ade B(38.5%)、aac A-aph D(34.6%)和bla Z(17.3%),未检出sep A、smr-1和mec A,所有菌株均为甲氧西林敏感菌;毒力基因检出率为:sec(94.2%)、seg(7.7%)、sei(7.7%)和tst(5.8%),未检出sea,seb,see,sej,pvl和eta;系统发育树显示,本试验中DZ212、DZ311、DZ412、DA61和DA101与FJ434467.1(哈尔滨)亲缘关系最为接近;经MLST分析后,本试验发现了1个新的序列型(ST7080)和2个新的等位基因(aro E-1010,glp F-877),经e BURST算法推测ST398可能是ST7080的进化源头,两者在生物学特性上可能存在相似处。2.金葡菌ndhF缺失株耐药相关研究。本部分试验测定金葡菌BA01611(野生株),BA01611-?ndhF(敲除株),BA01611-?ndhF+ndhF(回补株)耐药相关的功能,包括耐药性、适应性代价(生长和毒力)和细胞壁形态变化。结果表明敲除ndhF基因后,金葡菌对多粘菌素E、乳酸链球菌素和庆大霉素耐药性提高,生长趋势和溶血性未受到影响,但其引起细胞炎症能力极显著降低,而其细胞壁形态未受到明显影响。综上所述,本研究阐述了当地黑山羊中金葡菌的耐药表型和基因型以及毒力,并根据分型分析其流行类型和未来进化趋向;在金葡菌ndhF缺失株耐药相关功能研究中,阐明了ndhF缺失对金葡菌耐药性、适应性代价(生长和毒力)及细胞壁形态的影响,为当地金葡菌感染的防治及后续相关耐药研究提供试验思路以及数据支持。
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