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目的：
金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus,SA），特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistantStaphylococcusaureus,MRSA）是引起医院和社区感染的主要病原菌之一。夫西地酸是一种强脂溶性的梭链孢酸类，是一种很有疗效的抗MRSA药物，然而随着夫西地酸在临床上的使用，耐药性也无法避免地产生。本研究通过检测金黄色葡萄球菌对夫西地酸的耐药性，同时对夫西地酸耐药株进行耐药机制和分子特征的研究，以了解夫西地酸耐药金黄色葡萄球菌的流行情况，发现其分子特征，为临床控制夫西地酸耐药金黄色葡萄球菌感染提供依据。
方法：
收集2013年10月至2016年3月温州医科大学附属第一医院临床分离的1333株金黄色葡萄球菌，分别来自不同科室、不同病人和不同部位。通过革兰染色、触酶试验、凝固酶试验以及VITEK-2全自动微生物分析仪鉴定所分离菌株是否为金黄色葡萄球菌。用临床实验室标准协会（CLSI）推荐的头孢西丁纸片扩散法检测MRSA。用K-B法测定1333株金黄色葡萄球菌对夫西地酸的敏感性，夫西地酸抑菌圈≤17mm的金黄色葡萄球菌再用琼脂稀释法测定夫西地酸的MIC值。其结果解释根据欧洲抗菌药物敏感实验委员会推荐的标准，即MIC≤1μg/ml时判断为敏感，MIC＞1μg/ml时判断为耐药。对夫西地酸耐药的金黄色葡萄球菌株使用VITEK-2全自动微生物分析仪进一步检测其耐药谱。用PCR方法检测耐药基因fusB、fusC、fusD和金黄色葡萄球菌A蛋白基因（StaphylococcalsurfaceProteinAtyping,spa基因），同时用测序方法对fusB、fusC、fusD阴性的耐药菌株进行fusA基因突变检测。PCR方法检测金黄色葡萄球菌管家基因并进行多位点序列分型（Multilocussequencetypes,MLST）。
结果：
1．金黄色葡萄球菌对夫西地酸的耐药率和MIC值
1333株金黄色葡萄球菌中，共检出52株金黄色葡萄球菌对夫西地酸耐药，占3.90%。2013年到2016年的耐药率分别为5.3%（7/132）、3.5%（20/571）、4.1%（21/510）和3.3%（4/120）。夫西地酸对金黄色葡萄球菌的MIC值为2、4、8、64和>64μg/ml分别占26.9%（14/52）、34.6%（18/52）、13.5%（7/52）、1.9%（1/52）和23.1%（12/52）。耐药株分离的标本类型以创面渗液为主，占36.5%（19/52），其次为痰液和血液，分别占28.8%（15/52）和11.5%（6/52）。金黄色葡萄球菌对夫西地酸的MIC值≤64μg/ml的菌株占76.9%，标本类型以非痰液标本为主，MIC值>64μg/ml菌株占23.1%，标本类型主要为痰液，占75%。
2．耐夫西地酸金黄色葡萄球菌对常用抗菌药物的耐药性
52株耐夫西地酸的金黄色葡萄球菌对万古霉素、利奈唑胺、呋喃妥因和奎诺普丁/达福普汀等药物均表现为敏感；对青霉素、克林霉素和红霉素等药物则表现出较高的耐药率（＞69%）；而对环丙沙星、莫西沙星和四环素等药物仍有相对较高的耐药率，但均＜50%；对复方新诺明、庆大霉素和利福平耐药率较低（＜15%）。
3．耐夫西地酸金黄色葡萄球菌夫西地酸耐药相关基因fusB、fusC和fusD的检出情况及fusA基因突变的检测结果
52株耐夫西地酸的菌株中耐药基因总携带率为17.3%（9/52），其中7株fusB基因阳性，2株fusD阳性株，未检测到fusC阳性菌株。共检测到11株耐药菌株存在fusA基因突变，且MIC值均＞64μg/ml，其余菌株未发现fusA基因突变。fusA基因碱基突变结果：突变株和野生株碱基比对结果均发现AA→TT突变，导致的氨基酸突变，氨基酸突变位点为第461位L→K的突变（即L461K突变）。
4．耐夫西地酸金黄色葡萄球菌的分子特征
（1）52株耐药菌株的MLST分型除2株分型不明外共发现13种ST型，其中以ST630为主，占50%（26/52），其次为ST5，占17.3%（9/52）。MLST结果经eBURST软件分析后发现：50株ST型明确的耐药菌株分属于6个群（group）：group1、group3、group6、group7、group14和group20；8种克隆复合体（CC）：CC5、CC7、CC8、CC20、CC45、CC59、CC239和CC398，其中以CC8和CC5为主，分别占53.8%（28/52）和23.1%（12/52）。
（2）spa分型共发现19种序列型，以t4549（11/52）、t2460（8/52）和t377（8/52）为主，分别占21.2%、15.4%和15.4%。结合MLST和spa分型结果，耐药菌株中MIC值≤64μg/ml以ST630-t4549/t337为主要克隆株，占34.6%（18/52），MIC值>64μg/ml的耐药菌株中则以ST5-t2460为主导分型，占13.5%（7/52）。
结论：
1．夫西地酸对金黄色葡萄球菌临床分离株表现出较好的体外抗菌活性，耐药性相对较低，且保持相对稳定的耐药趋势。
2．夫西地酸高水平耐药的机制与fusA基因突变密切相关。耐药菌株中MIC值≤64μg/ml以ST630-t4549/t337为主导型别，而MIC值>64μg/ml的耐药菌株中则以ST5-t2460为主导型别。
金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus,SA），特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistantStaphylococcusaureus,MRSA）是引起医院和社区感染的主要病原菌之一。夫西地酸是一种强脂溶性的梭链孢酸类，是一种很有疗效的抗MRSA药物，然而随着夫西地酸在临床上的使用，耐药性也无法避免地产生。本研究通过检测金黄色葡萄球菌对夫西地酸的耐药性，同时对夫西地酸耐药株进行耐药机制和分子特征的研究，以了解夫西地酸耐药金黄色葡萄球菌的流行情况，发现其分子特征，为临床控制夫西地酸耐药金黄色葡萄球菌感染提供依据。
方法：
收集2013年10月至2016年3月温州医科大学附属第一医院临床分离的1333株金黄色葡萄球菌，分别来自不同科室、不同病人和不同部位。通过革兰染色、触酶试验、凝固酶试验以及VITEK-2全自动微生物分析仪鉴定所分离菌株是否为金黄色葡萄球菌。用临床实验室标准协会（CLSI）推荐的头孢西丁纸片扩散法检测MRSA。用K-B法测定1333株金黄色葡萄球菌对夫西地酸的敏感性，夫西地酸抑菌圈≤17mm的金黄色葡萄球菌再用琼脂稀释法测定夫西地酸的MIC值。其结果解释根据欧洲抗菌药物敏感实验委员会推荐的标准，即MIC≤1μg/ml时判断为敏感，MIC＞1μg/ml时判断为耐药。对夫西地酸耐药的金黄色葡萄球菌株使用VITEK-2全自动微生物分析仪进一步检测其耐药谱。用PCR方法检测耐药基因fusB、fusC、fusD和金黄色葡萄球菌A蛋白基因（StaphylococcalsurfaceProteinAtyping,spa基因），同时用测序方法对fusB、fusC、fusD阴性的耐药菌株进行fusA基因突变检测。PCR方法检测金黄色葡萄球菌管家基因并进行多位点序列分型（Multilocussequencetypes,MLST）。
结果：
1．金黄色葡萄球菌对夫西地酸的耐药率和MIC值
1333株金黄色葡萄球菌中，共检出52株金黄色葡萄球菌对夫西地酸耐药，占3.90%。2013年到2016年的耐药率分别为5.3%（7/132）、3.5%（20/571）、4.1%（21/510）和3.3%（4/120）。夫西地酸对金黄色葡萄球菌的MIC值为2、4、8、64和>64μg/ml分别占26.9%（14/52）、34.6%（18/52）、13.5%（7/52）、1.9%（1/52）和23.1%（12/52）。耐药株分离的标本类型以创面渗液为主，占36.5%（19/52），其次为痰液和血液，分别占28.8%（15/52）和11.5%（6/52）。金黄色葡萄球菌对夫西地酸的MIC值≤64μg/ml的菌株占76.9%，标本类型以非痰液标本为主，MIC值>64μg/ml菌株占23.1%，标本类型主要为痰液，占75%。
2．耐夫西地酸金黄色葡萄球菌对常用抗菌药物的耐药性
52株耐夫西地酸的金黄色葡萄球菌对万古霉素、利奈唑胺、呋喃妥因和奎诺普丁/达福普汀等药物均表现为敏感；对青霉素、克林霉素和红霉素等药物则表现出较高的耐药率（＞69%）；而对环丙沙星、莫西沙星和四环素等药物仍有相对较高的耐药率，但均＜50%；对复方新诺明、庆大霉素和利福平耐药率较低（＜15%）。
3．耐夫西地酸金黄色葡萄球菌夫西地酸耐药相关基因fusB、fusC和fusD的检出情况及fusA基因突变的检测结果
52株耐夫西地酸的菌株中耐药基因总携带率为17.3%（9/52），其中7株fusB基因阳性，2株fusD阳性株，未检测到fusC阳性菌株。共检测到11株耐药菌株存在fusA基因突变，且MIC值均＞64μg/ml，其余菌株未发现fusA基因突变。fusA基因碱基突变结果：突变株和野生株碱基比对结果均发现AA→TT突变，导致的氨基酸突变，氨基酸突变位点为第461位L→K的突变（即L461K突变）。
4．耐夫西地酸金黄色葡萄球菌的分子特征
（1）52株耐药菌株的MLST分型除2株分型不明外共发现13种ST型，其中以ST630为主，占50%（26/52），其次为ST5，占17.3%（9/52）。MLST结果经eBURST软件分析后发现：50株ST型明确的耐药菌株分属于6个群（group）：group1、group3、group6、group7、group14和group20；8种克隆复合体（CC）：CC5、CC7、CC8、CC20、CC45、CC59、CC239和CC398，其中以CC8和CC5为主，分别占53.8%（28/52）和23.1%（12/52）。
（2）spa分型共发现19种序列型，以t4549（11/52）、t2460（8/52）和t377（8/52）为主，分别占21.2%、15.4%和15.4%。结合MLST和spa分型结果，耐药菌株中MIC值≤64μg/ml以ST630-t4549/t337为主要克隆株，占34.6%（18/52），MIC值>64μg/ml的耐药菌株中则以ST5-t2460为主导分型，占13.5%（7/52）。
结论：
1．夫西地酸对金黄色葡萄球菌临床分离株表现出较好的体外抗菌活性，耐药性相对较低，且保持相对稳定的耐药趋势。
2．夫西地酸高水平耐药的机制与fusA基因突变密切相关。耐药菌株中MIC值≤64μg/ml以ST630-t4549/t337为主导型别，而MIC值>64μg/ml的耐药菌株中则以ST5-t2460为主导型别。