双光源光学相干断层成像在青光眼鼠视网膜神经纤维层检查中的应用研究

来源 :南昌大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chengl1987
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青光眼是全球第二大致盲性眼病、第一大不可逆转型致盲性眼病,其视神经损害的不可逆性决定了青光眼早发现、早诊断在预防和治疗中的重要性。频域光学相干光断层成像(optical coherence tomography,OCT)能够直观地检测青光眼患者视网膜神经纤维层(retinal nerve fiber layer,RNFL)厚度的变化,但等到视网膜神经纤维层的厚度发生变化时患者常已出现视神经功能损害。目前研究证明轴突超微结构的变化早于视网膜神经纤维层厚度的变化。如有OCT能够早期非侵入的检测到眼压升高时轴突超微结构的变化则为青光眼的早期发现、早期诊断提供临床检查依据,为青光眼的进一步深入研究提供新的思路和更开阔的视野。目的:通过双光源OCT对青光眼鼠视网膜神经纤维层的成像强度和视网膜神经纤维层的厚度进行检测,得出结论是否神经纤维层的成像强度的改变在厚度改变之前。在视网膜神经纤维层变薄之前早期发现青光眼,为青光眼的早期治疗避免视功能出现不可逆的损害赢得时间。为双光源OCT的临床运用奠定实验基础。方法:青光眼鼠的造模:应用532激光光凝美国Sprague Dawley(SD)大鼠的角膜缘静脉及每个巩膜房水引流静脉。3天后用532激光光凝小梁网,两个相隔3天的激光光凝后,可以快速提高大鼠眼压,高眼压维持一周即可出现视网膜神经纤维层的损伤和改变。这种高眼压大鼠模型,其视网膜神经节细胞丧失,视网膜神经纤维层损伤,与人类青光眼的病理改变的机制极其相似。目前临床上OCT的检查光源皆为近红外光,其原理是通过对视网膜神经节细胞的轴突即视网膜神经纤维的反射率的测量来测定视网膜神经纤维的厚度。双光源OCT通过增加OCT的扫描光源,即在红外光基础上增加一种532nm的可见光为检查光源,根据两种光源成像强度比值的变化来检测视网膜神经节细胞轴突的细胞骨架的损伤变化。如果这种比值变化出现在视网膜神经纤维层变薄之前,且可被成功检测出来,则可为青光眼的早期发现提供客观及科学的依据。再结合免疫染色的结果,对青光眼鼠视网膜神经纤维层轴突细胞骨架的结构进行定量分析,证实其早期改变。用免疫组化共聚焦成像法观察青光眼鼠视网膜神经节细胞轴突的细胞骨架成分:微管(microtubules,MTs)、f-肌动蛋白(F-actin)和神经纤维细丝(neurofilaments,NFs)的改变。多个荧光染色剂用于在同一组织中同时染色F-actin,MT,NF和核。通过共聚焦显微镜检查这些成分在整个视网膜铺片中的分布。结果:双光源OCT在青光眼鼠中可见光532nm的蓝绿光测得的视网膜神经纤维层的成像强度与红外光测得的视网膜神经纤维层的成像强度比值下降,且双光源OCT可见光测得的视网膜神经纤维层的成像强度与红外光测得的成像强度比值下降出现在神经纤维层变薄之前。在青光眼鼠的视网膜神经纤维束中发现了F-肌动蛋白,MT和NF的不规则染色。F-肌动蛋白的网状物出现在RNFL表面和束之间。在严重受损的视网膜区域中,发现F-肌动蛋白和MTs完全丧失,而NFs的残留束很明显。在RNFL厚度减少之前,RNFL中F-肌动蛋白染色的不规则性和细胞核密度显著增加。结论:在青光眼鼠中双光源OCT可见光532nm的蓝绿光测得的神经纤维层的成像强度与红外光测得的成像强度比值下降出现在神经纤维层变薄之前。双光源OCT能在活体当中无侵入性、直观地检测青光眼鼠视网膜神经纤维层细胞骨架的超微结构的早期变化和视网膜神经纤维层厚度的变化。
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